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西瓜属于葫芦科蔬菜作物,是重要的经济作物之一。长期以来,常规的遗传育种的周期长、工作量大、遗传性状不稳定以及栽培种遗传基础狭窄等因素极大的限制了西瓜一代杂种的育种进程。因此,如何提高优良自交系的选育速度,并对优良单株的保存和利用,成为西瓜一代杂种育种的关键。利用生物技术手段进行种质资源创新,可以加快培育和保存优质、高产的新品种。
本试验采用6个不同基因型的西瓜自交系为材料,探讨了西瓜花药和未受精子房离体培养发育途径和培养过程中的各种影响因素,并对各种影响因素范围进行限定,提高西瓜花药和未受精子房愈伤组织的诱导率,为今后西瓜单倍体植株的研究奠定基础:此外,研究了西瓜子叶离体培养的技术体系,为进一步完善离体培养再生体系和种质资源创新提供依据。主要结果如下:
(1)西瓜花药取材外形特征为:未开花,浅绿色,花蕾纵径4.5-6.5mm,横径4.4-5.1mm,花瓣与花萼大致等长或稍长,花蕾明显膨大,萼片张开。
(2)在花药诱导愈伤组织的培养中,采用春季盛花期的花药,在4℃预处理72h后,愈伤组织诱导率较高,而且愈伤组织生长迅速、质地紧密,有一定的分化潜力;以正交试验筛选出2个诱导效果比较好的激素配方,分别为KT0.5mg/L+6-BA1.5 mg/L+NAA1.0 mg/L、KT1.5 mg/L+6-BA1.0 mg/L+NAA1.5 mg/L,在此基础上,发现本试验的6个基因型的材料花药愈伤组织诱导率有较大的差异,编号122最高,达80.34%;以添加30g/L蔗糖和50g/L的葡萄糖效果较好,黑暗培养7天后可以提高愈伤组织诱导率。在愈伤组织增殖和分化培养中,以在MS+NAA1.0mg/L+6-BA0.25mg/L的培养基中愈伤组织增殖效果最好,尝试调节6-BA和IAA的浓度比例仍未能诱导出不定芽。
(3)在未受精子房诱导愈伤组织的培养中,以正交试验筛选出2个诱导效果比较好的激素配方,分别为2,4-D1.5mg/L+NAA1.0 mg/L+6-BA0.25 mg/L、2,4-D1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L+6-BA1.0 mg/L;接种的适宜时期是开花当日,以添加40g/L的蔗糖效果较好,4℃的预处理72h亦能提高愈伤组织诱导率,基因型的差异与花药诱导大致相同;添加活性炭对愈伤组织诱导率无明显的影响。
(4)在子叶离体培养中,筛选出MS+6-BA2mg/L为最佳培养基,并以子叶基部的诱导不定芽的效果较好,添加2mg/L的AgNO3能显著提高每块外植体的再生芽数,生根培养基为MS+IAA0.3mg/L。