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金丝桃素（Hypericin）是贯叶连翘Hypericumperforatum L.中最具生物活性的物质,具有抗抑郁、抗肿瘤和抗艾滋病病毒、肝炎病毒、疱疹病毒、禽流感病毒等多种逆转录病毒的作用,近年来对医药领域其关注度和需求量都在快速提升。本研究将市售贯叶连翘提取物3kg经硅胶柱层析预处理,得到4.5g金丝桃素半成品,再用高速逆流色谱法进一步纯化精制,以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（3-5-3-5）为溶剂系统,下相为流动相,上相为固定相,主机转速800 r/min,流动相流速为2.5 ml/min,检测波长590 nm,每次进样量40 mg,共用12次完成了金丝桃素的大量制备,最终制得2g金丝桃素单体,经液相检测其纯度大于98%,应用1H-NMR和13C-NMR进行鉴定,证明确为金丝桃素。胰岛细胞瘤会引发神经低血糖症状和永久性神经损伤,甚至会导致病人死亡。目前临床上使用的治疗方法,对于恶性胰岛细胞瘤和良性胰岛细胞瘤都没有令人满意的治疗效果。金丝桃素作为光动力学疗法药物对一些恶性肿瘤进行治疗时,显示出了良好的治疗效果和极低的副作用,这促使我们研究利用光激活的金丝桃素抑制RINm5F胰岛瘤细胞增殖的可行性,并探讨其作用的基本机制。我们的实验结果表明,用金丝桃素孵育RINm5F细胞,在加药20分钟后,细胞内即可检测到金丝桃素,在加药60分钟后,金丝桃素在细胞内的积累达到最大峰值。金丝桃素在细胞内的定位与质膜结构密切相关,其定位在细胞的质膜结构区域内,尤其显著地积累在细胞质中。利用荧光标记和激光共聚焦技术,我们发现金丝桃素能够定位在细胞质内的内质网、高尔基体以及线粒体等细胞器上。对进入细胞内的金丝桃素进行光激活,细胞的形态会发生改变。光激活的金丝桃素能够通过抑制增殖和诱导凋亡的方式降低RINm5F细胞的活力。金丝桃素抑制细胞增殖的作用主要体现在降低细胞中增殖蛋白Ki67的表达,以及诱导细胞发生G0/G1期细胞周期停滞。而且,金丝桃素的抗增殖作用是通过下调MAPK信号通路中JNK和ERK的磷酸化水平实现的。光激活的金丝桃素还可以激活细胞内的caspase-9和caspase-3,改变bax和bcl-2的表达比率,诱导RINm5F发生细胞凋亡。此外,我们用IlluminaNextseq 500对金丝桃素处理过的细胞进行了RNA-Seq测序分析,测序数据与之前的实验结果相符,从基因表达的水平上证明了金丝桃素影响细胞增殖及凋亡相关基因的表达。综上所述,本文的研究结果为实现以金丝桃素作为光动力学药物应用于胰岛细胞瘤的治疗打下了坚实的基础。