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目的：对病证模型大鼠的含药血清进行分析,探讨生姜、干姜、炮姜止呕及温中散寒的药效物质。
方法：
1 生姜、干姜、炮姜药材特征色谱研究
1.1 HPLC色谱研究：采用HPLC色谱法建立生姜、干姜、炮姜药材的特征色谱,并分别采集六批药材进行HPLC色谱分析。
1.2 GC色谱研究：采用GC色谱法建立生姜、干姜、炮姜药材的特征色谱,并分别采集六批药材进行GC色谱分析。
采用药典委员会指纹图谱相似度评价软件(2004 A版)进行相似度评价,建立生姜、干姜、炮姜的特征图谱。
2 生姜、干姜、炮姜药效观察
2.1 止呕药效观察：采用腹腔注射顺铂溶液的方法复制大鼠异嗜高岭土模型。并通过观察正常饲料和高岭土饲料进食量,评价生姜、干姜、炮姜的止呕作用。
2.2温中药效观察：采用灌胃4℃食醋复制大鼠脾胃虚寒模型,观察大鼠体重、进食量、胃排空率与小肠推进率,以及胃泌素和胃动素含量,评价生姜、干姜、炮姜的温中作用。
3 生姜、干姜、炮姜的血清药效物质研究：取止呕和温中实验的大鼠血清,用HPLC、GC的方法,分析含药血清,通过与药材、大鼠正常血清的HPLC及GC色谱图比较,研究姜在血中的移行成分,探索生姜、干姜、炮姜止呕和温中的药效物质。
结果：
1 建立了生姜、干姜、炮姜HPLC特征色谱
将姜的不同炮制品洗净切块,精密称取 10g,放置于平底烧瓶中,第一次加 80ml甲醇,回流提取30min。第二次加50ml甲醇,回流提取30min。将两次提取液合并,回收甲醇,定容至10ml。取2ml过0.2mm滤膜,进样。色谱条件： Dikma Platisil ODS C18色谱柱(5mm,250×4.6mm ),检测波长：240nm；流速：0.8ml∕min；流动相：A为水,B为乙腈；洗脱梯度为：10%B (0min)→20%B (10min) → 50%B (20min) →70%B (40min)→85%B (55min)→100%B (60min)。建立生姜,干姜和炮姜的HPLC特征图谱。按上述方法采集生姜、干姜、炮姜六批药材HPLC色谱,确定了6个共有峰,并以6-姜酚的吸收峰为基准,计算了各共有峰的相对保留时间和相对峰面积,每个样品的非共有峰面积占总峰面积均小于 30%。计算了不同批次生姜、干姜、炮姜色谱图的相似度,结果均在0.90以上。
2 建立了生姜、干姜、炮姜GC特征色谱
按中国药典2005版一部附录中挥发油提取和测定的标准方法(甲法)进行。色谱条件：HP-5MS,5%苯甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25mm)进样口温度：250℃,柱室温度：初始温度80℃,以4℃/min升温速率升至150℃,再以2℃/min 升至170℃(保持5min) 载气：高纯氮气。柱前压64.3kPa,流速1ml/min,分流10：1进样量0.2ml。按上述方法采集生姜、干姜、炮姜六批药材GC色谱,确定了6个共有峰,计算了各共有峰的相对保留时间和相对峰面积,每个样品的非共有峰面积占总峰面积均小于30%。
3 生姜、干姜、炮姜的止呕药效观察：
生姜汁高、低剂量组和生姜水煎液高、低剂量组能够显著增加异嗜高岭土模型大鼠的正常饲料进食量,明显降低模型大鼠高岭土进食量,表明生姜具有显著的止呕作用。干姜和炮姜能够在一定程度上改善模型大鼠异嗜高岭土的行为,但效果不明显。
4 生姜、干姜、炮姜的温中药效观察：
干姜高剂量能够显著增加模型大鼠小肠推进率,降低胃排空率,提高血液中胃泌素和胃动素含量,对脾胃虚寒模型具有显著改善作用。干姜低剂量能够显著降低模型大鼠胃排空率,提高模型大鼠血液中的胃泌素含量。炮姜高、低剂量组可以显著提高模型大鼠血液中胃泌素和胃动素的含量。而生姜汁和生姜水煎液仅表现出对脾胃虚寒大鼠的轻度缓解趋势。
5 生姜、干姜、炮姜的血清药效物质研究：
HPLC色谱研究发现：止呕实验中,在生姜水煎液高、低剂量组的含药血清色谱图中发现1个有价值的目标成分,通过与标准品比对,该物质为6-姜酚。温中实验中,在干姜和炮姜高剂量组的含药血清色谱图中发现1个目标成分,经确认该物质也是6-姜酚。
GC色谱研究中,未在大鼠含药血清的色谱图中发现姜的移行成分。
结论：生姜、干姜、炮姜的HPLC、GC特征色谱稳定、可靠,符合特征色谱的技术要求。也为本实验进行体内外色谱图的比对奠定了基础；生姜、干姜、炮姜的药效实验,验证了生姜汁和生姜水煎液的止呕药效及干姜和炮姜水煎液的温中药效；对大鼠含药血清的分析,确认生姜止呕作用的药效物质基础为 6-姜酚；干姜、炮姜温中作用的药效物质基础为6-姜酚。依据“性效同源”理论,我们推断6-姜酚为姜“温”性的物质基础。