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Expansin基因家族是一类巨大的基因家族,主要分为α-expansm与β-expansin两类,分别都具有很多的基因成员,广泛的存在于多种植物中,目前已有大量的expansin基因被克隆。其所编码的扩张蛋白属于细胞壁酶蛋白,在植物体中表达具有高度的专一性,其表达调控受到植物体自身发育进程、外源激素以及环境因子的调控。研究表明,Expansin基因对植物种子萌发、根系生长、茎、叶片生长发育、果实成熟软化、器官脱落等等方面都起着重要作用,几乎参与了整个植物生长发育过程。本研究在本实验室原有研究基础上,在蜡梅中克隆到了另外一个expansin基因,命名为CpEXP2。构建了植物表达载体,通过农杆菌介导转化拟南芥,获得了T1代转基因植株;构建了原核表达载体,在大肠杆菌中表达了CpEXP2。主要研究结果如下:1.蜡梅expansin基因CpEXP2的克隆通过随机挑选蜡梅cDNA文库测序,获得了大小为1115bp的cDNA序列,序列分析表明,该基因包含一个771bp的ORF框,编码蛋白长257个氨基酸,BLASTX比对结果显示,与α-expansin的同源性更高,初步推定所获得的cDNA编码Expansin扩展蛋白。命名CpEXP2。2.植物表达载体的构建CpEXP2基因位于文库克隆载体pTriplEx2上,活化菌液并用限制性内切酶SfiI酶切,同时酶切添加了SfiI酶切位点的环状pMD-18TM,回收目的片段和载体并连接,经过酶切和PCR验证,成功构建了克隆载体;再用XbaI和SmaI分别双酶切克隆载体和表达载体pC2301,回收目的片段和表达载体并连接,经酶切和PCR验证,成功构建了含有目的基因的表达载体。3.对拟南芥的遗传转化通过农杆菌介导将含有蜡梅扩张蛋白基因CpEXP2的植物表达载体转入拟南芥中,经过Km+抗性筛选检测,PCR检测,证明CpEXP2基因已经初步整合入拟南芥基因组中,且T1代转基因植株生长正常。4.原核表达载体构建设计带BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物,PCR扩增蜡梅CpEXP2基因,用BamHⅠ和HindⅢ分别双酶切蜡梅CpEXP2基因和原核表达载体PET-28a,然后将蜡梅CpEXP2基因连接到原核表达载体PET-28a上,经过酶切与PCR验证,表明已经成功构建了含有目的基因的原核表达载体。5.CpEXP2基因在大肠杆菌中的诱导表达将构建好的原核表达载体转入大肠杆菌中,通过合适的诱导条件,诱导CpEXP2基因在E.coliBL21中表达,并通过SDS-PAGE检测重组蛋白证明了CpEXP2基因的表达。