珠子参皂苷联合5-FU对人宫颈癌caski细胞的作用研究

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  目的:探讨珠子参皂苷(PJ)单独及其与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对人宫颈癌caski细胞诱导其凋亡的作用,为临床上联合应用珠子参皂苷和5-FU治疗宫颈癌提供实验依据。   方法:(1) 取珠子参生药材,以醇提法制备珠子参皂苷粉末。(2) 体外培养人颈鳞癌Caski细胞系细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度的5-FU、珠子参以及合用在作用24、48及72h对caski细胞增殖的影响以及倒置相差显微镜观察细胞形态的变化。(3) 选择适宜浓度的PJ 、5-FU及PJ与5-FU的合用组作用于Caski细胞,电镜下观察caski细胞形态的变化。(4) qPCR检测不同药物处理后抑癌基因p53,p21与癌基因c-myc,c-fos的表达情况。(5) Western blot检测PJ 、5-FU及PJ与5-FU的合用处理后p53,p21蛋白及c-myc,c-fos蛋白的表达情况。   结果:(1) MTT比色法显示:PJ能抑制caski细胞的增殖,PJ和5-FU合用能增强单药对caski细胞的增殖抑制作用。(2) 通过透射电子显微镜观察发现:PJ 可明显抑制宫颈癌 caski 细胞的生长,细胞出现细胞膜微绒毛减少或消失,细胞活跃度明显下降,细胞内出现凋亡小体,PJ与5-FU合用组抑制caski细胞生长作用最明显,凋亡细胞增多,出现凋亡晚期的蟹爪状细胞,整体凋亡细胞比例增加。(3) qPCR法结果显示:PJ可上调抑癌基因p53,p21的表达,下调癌基因c-myc,c-fos的表达;与5-FU组相比,PJ和5-FU合用组在上调抑癌基因p53,p21的表达,下调癌基因c-myc,c-fos表达的作用更加明显。(4)Western blot结果表明:PJ可上调p53蛋白的表达,显著上调p21蛋白的表达,显著下调c-myc,c-fos蛋白的表达;与5-FU组相比,PJ和5-FU合用组在上调p53,p21蛋白,下调c-myc,c-fos蛋白表达上的作用更加明显。   结论:本实验所选用剂量的PJ对人宫颈癌caski细胞有明显抑制增殖的作用,进一步证明了PJ在体外可抑制肿瘤细胞生长。PJ与5-FU合用能增强5-FU对caski细胞的增殖抑制作用,PJ与5-FU合用可诱导人宫颈癌caski细胞的凋亡,表明PJ可增强5-FU对人宫颈癌的抑制作用及诱导凋亡的作用。PJ与5-FU合用可能通过影响caski细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布、诱导凋亡发挥抑制细胞增殖作用,其分子机制可能与上调p53,p21的表达,下调c-myc,c-fos的表达有关。本研究结果提示了PJ抑制肿瘤细胞生长的作用及与化疗药物5-FU合用的增效作用。可在此基础上进一步探讨PJ及PJ与5-FU合用上调p53、p21,下调c-myc、c-fos的mRNA及蛋白表达相关的调控途径和机制。
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