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目的：膜联蛋白a2(Annexin a2, Anxa2)是一种钙离子依赖的磷脂结合蛋白,在侵袭性肿瘤中表达明显增高。前期研究结果提示与亲本细胞相比,有多药耐药表型的乳腺癌细胞的迁移能力明显提高,Anxa2可能是一个与肿瘤的耐药和转移双重表型相关的重要分子。本研究通过提高乳腺癌细胞中Annexin a2的表达和降低耐药乳腺癌细胞中Annexin a2的表达的干预实验研究,观察Annexin a2的表达对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并进一步探索Annexin a2参与调节耐药乳腺癌细胞迁移及侵袭的分子机制。方法：1.应用基因克隆技术增高人乳腺癌MCF-7细胞中Annexin a2蛋白的表达水平；RNA干扰技术降低其多药耐药MCF-7/ADR细胞中Annexin a2蛋白的表达水平,并分别用Western blotting技术对蛋白表达量进行检测。2.低剂量(0.01μM)阿霉素作用MCF-7细胞,观察其Annexin a2表达量的变化。3.应用测定细胞生长曲线实验检测Annexin a2的高表达对MCF-7细胞增殖能力的影响。4.应用克隆形成实验检测Annexin a2的高表达对MCF-7细胞克隆形成能力的影响。5.采用流式细胞术检测Annexin a2高表达对MCF-7细胞周期分布的改变。6.应用划痕实验检测Annexin a2高表达对MCF-7细胞的迁移能力的影响。7.采用体外迁移、侵袭实验检测Annexin a2的高表达对MCF-7细胞的体外迁移、侵袭能力的影响。8.建立动物模型,观察检测Annexin a2的表达对耐药乳腺癌MCF-7/ADR细胞在体内成瘤速度及成瘤率的变化。9.应用Western blotting技术检测A2蛋白表达量变化对周期相关蛋白表达水平的影响及ERK通路的激活情况,进一步明确Annexin a2调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。结果：1.构建真核细胞融合表达载体pcDNA3.1-Anxa2,将该载体转染MCF-7细胞,筛选到三株单克隆细胞株,与亲本细胞相比,A2的表达量增高三倍以上；应用RN A干扰技术转染人乳腺癌MCF-7/ADR细胞后筛选得到Annexin a2蛋白表达水平下降80%-100%的2株单克隆细胞。2. Annexin a2表达水平上升后MCF-7细胞增殖能力显著增强(P<0.05)。3. Annexin a2基因高表达后MCF-7细胞克隆形成能力显著提高(P<0.01)。4. Annexin a2表达水平提高导致MCF-7细胞的增殖指数上升,细胞周期G0/G1期比例下降,G2/M+S期比例显著提高(P<0.05)。5.划痕实验发现Annexin a2高表达后乳腺癌MCF-7细胞的迁移能力显著增强(P<0.05)。6.体外侵袭实验结果表明Annexin a2高表达后细胞的体外侵袭能力显著提高(P<0.01)。7.体内实验结果发现Annexin a2降表达后明显抑制了乳腺癌MCF-7/ADR细胞的增殖(P<0.05)。8. Western blotting技术检测发现MCF-7细胞中Annexin a2高表达后C-myc、 CyclinD1的表达水平明显提高,Annexin a2基因降表达后C-my、Cyclin D1的表达水平显著下降;并发现Annexin a2有可能通过参与ERK通路的激活过程。结论：1. Annexin a2表达水平增高后,MCF-7细胞的增殖能力和克隆形成能力提高,细胞增确指数上升,细胞周期分布G0/G1期比例下降,G2/M+S期比例显著升高。Annexin a2表达水平上升后C-myc和CyclinD1的表达水平增高,表明Annexin a2通过影响C-myc和CyclinD1的表达水平从而调节乳腺癌细胞的增确过程。2. Annexin a2基因高表达后,MCF-7细胞的迁移能力显著提高,体外侵袭能力明显增强。3. Annexin a2基因沉默后MCF-7/ADR细胞的体内成瘤速度和成瘤率均显著下降。4.Annexin a2表达水平增高后,MCF-7细胞的ERK通路激活时间提前;Annexin a2表达水平下降后,MCF一7/ADR细胞的ERK通路激活时间推迟。表明Annexin a2在乳腺癌MCF-7细胞中有可能通过参与ERK通路的激活过程上调C-myc、CyclinD1的表达水平来调控肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移过程。