经血宁胶囊凝血活性部位筛选及其相关药效学实验研究

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目的:对经血宁胶囊有效部位即经血宁正丁醇提取部位C(JXN-C)进行相关的药效学研究及其作用机制探讨。综合评价经血宁胶囊治疗子宫出血作用,为进一步研究开发经血宁胶囊(5类中药新药)提供实验依据。  方法:1.止血试验:(1)JXN-C对凝血时间(coagulation time,CT)的影响(载玻片法和毛细玻管法);(2)JXN-C对家兔凝血酶时间(thrombin time,TT)、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、纤维蛋白原(fibrinogen,Fbg)的影响;(3)测定血小板计数(platelet,PLT)和血浆复钙时间(plasma recalcification time,PRT),明确其凝血作用机制。2. JXN-C对家兔血管舒缩功能影响的试验。3. JXN-C对家兔离体子宫平滑肌收缩的影响。4.动物子宫出血模型治疗试验:建立药物性流产大鼠子宫出血模型,观察经血宁正丁醇提取部位 C(JXN-C)对药物性流产大鼠子宫出血总量的影响;对大鼠子宫重量的影响;采用ELISA法进行大鼠前列腺素(PGF2a)酶联免疫分析;用苏木精一伊红(Hematoxylin and Eosin Staining,HE)染色,光镜下观察子宫组织形态结构。5.抗炎实验:(1)JXN-C对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响试验(容积测量法),计算足跖炎症肿胀程度;(2)JXN-C对角叉菜胶致足趾肿胀大鼠血清中炎症介质(NO)水平的影响(硝酸还原酶法);(3)JXN-C对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响(重量法);(4)小鼠耳廓肿胀法。6.镇痛实验:JXN-C对催产素诱发痛经的镇痛试验。7.经血宁正丁醇提取部位C(JXN-C)急性毒性试验(最大耐受量Maximal tolerance dose,MTD)测定。  结果:1.经血宁正丁醇提取部位 C(JXN-C)可明显缩短体外凝血时间。JXN-C高剂量(9g生药/kg)可明显缩短凝血时间和血浆复钙时间(PRT),与空白对照组比较有显著性差异P<0.05。2. JXN-C具有兴奋子宫平滑肌作用。JXN-C不同浓度可提高子宫收缩频率、振幅和张力。3. JXN-C具有收缩血管平滑肌作用。JXN-C不同浓度可使家兔主动脉血管收缩曲线上移,张力提高。其收缩强度与剂量呈正相关。4.JXN-C可减少药物性流产大鼠子宫出血量,有较好的量效关系,并且随着时间的推移子宫出血量逐渐减少。酶联免疫分析(ELISA法)结果显示,JXN-C对大鼠前列腺素(PGF2a)水平无明显的影响。镜下观察空白组大鼠子宫内膜处于动情间期或动情期,呈正常增殖期子宫。用药组子宫内膜处于动情间期或动情期,均未见蜕膜组织。5. JXN-C具有较好的抗炎作用。对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀有较明显的抑制作用,可显著降低角叉菜胶致炎大鼠血清中炎症介质(NO)的水平;对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀也有较明显的抑制作用。6. JXN-C对催产素致小鼠子宫平滑肌痉挛痛经无明显镇痛作用。7. JXN-C对小鼠经口的MTD为288g药材/kg,相当于成人日用量的486倍。表明毒性低。  结论:1. JXN-C可明显缩短体外凝血时间。2. JXN-C对家兔离体子宫平滑肌和主动脉血管平滑肌具有较好的收缩作用,其收缩强度与剂量呈正相关。3. JXN-C可减少药物性流产大鼠的出血量;对大鼠前列腺素(PGF2a)水平无明显的影响;用药组子宫内膜处于动情间期或动情期,均未见蜕膜组织。4. JXN-C具有较好的抗炎作用。而对催产素致小鼠子宫平滑肌痉挛痛经无明显镇痛作用。5. JXN-C对小鼠经口MTD为288g药材/kg,相当于成人日用量486倍,毒性低。
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