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整体柱作为高效液相色谱的固定相,在蛋白质等生物大分子的分离分析中展现出特有的优势。然而目前的整体柱多具有比表面积小、选择性差和易溶胀或收缩的缺点。为了改善整体柱的色谱性能,充分发挥其在蛋白质分离中的优势,本文将两种烯丙酯类单体引入到整体柱的制备中,以增大比表面积,增加蛋白质与固定相之间的识别位点;丰富固定相表面的化学基团,提高色谱柱的分离选择性;增强整体柱的机械稳定性,避免溶胀或收缩。
首先,以马来酸二烯丙酯为单体制备了整体柱,研究了单体与交联剂配比和致孔剂组成对整体柱性能的影响。通过扫描电镜、氮吸附-脱附法和压汞法表征了整体柱的内部形貌和孔结构的特征。结果表明制备的整体柱有相对均匀的大孔结构,最可几孔径、孔隙率和比表面积分别为3.02μm、74.49%和26.06m2g-1。将该整体柱作为高效液相色谱的固定相,在3min内实现了对五种标准蛋白质混合物的快速分离。结果表明,蛋白质的表观保留时间随蛋白质的相对疏水性的增加而增加。此外,利用该整体柱在15min内实现了对人血浆蛋白质的快速分级分离,并通过液相色谱/质谱技术对其中一些色谱馏分进行鉴定,结果表明,不同馏分中含有的蛋白质种类不同,表明该方法是一种有效的人血浆快速分级分离方法。
其次,为了增大整体柱的比表面积,以含有芳香环基团的苯氧乙酸烯丙酯为单体制备了整体柱,研究了致孔剂组成、交联剂用量和单体类型对整体柱性能的影响。采用扫描电镜、氮吸附-脱附法和压汞法对其进行表征。结果表明,该整体柱具有微孔、介孔和大孔的三维孔结构,比表面积高达260.66m2g-1。将该整体柱作为高效液相色谱固定相对标准蛋白质的混合物、蜗牛酶、鸡卵清及人血浆等复杂生物样品进行了分离。结果表明,与基于甲基丙烯酸缩水甘油酯和苯乙烯的整体柱相比,本文制备的整体柱对于蛋白质具有更好的选择性。此外,本方法还能够避免人血浆中三种最高丰度蛋白质对于其他蛋白质的掩盖作用。通过液相色谱/质谱技术对人血浆蛋白质中的一些色谱馏分进行鉴定,结果表明,不同馏分中含有的蛋白质种类不同,表明该方法是一种有效的蛋白质分级分离方法,对于血浆蛋白质组学的后续研究,特别是对于探索新的疾病标志蛋白质和药物靶点的研究具有重要意义。
首先,以马来酸二烯丙酯为单体制备了整体柱,研究了单体与交联剂配比和致孔剂组成对整体柱性能的影响。通过扫描电镜、氮吸附-脱附法和压汞法表征了整体柱的内部形貌和孔结构的特征。结果表明制备的整体柱有相对均匀的大孔结构,最可几孔径、孔隙率和比表面积分别为3.02μm、74.49%和26.06m2g-1。将该整体柱作为高效液相色谱的固定相,在3min内实现了对五种标准蛋白质混合物的快速分离。结果表明,蛋白质的表观保留时间随蛋白质的相对疏水性的增加而增加。此外,利用该整体柱在15min内实现了对人血浆蛋白质的快速分级分离,并通过液相色谱/质谱技术对其中一些色谱馏分进行鉴定,结果表明,不同馏分中含有的蛋白质种类不同,表明该方法是一种有效的人血浆快速分级分离方法。
其次,为了增大整体柱的比表面积,以含有芳香环基团的苯氧乙酸烯丙酯为单体制备了整体柱,研究了致孔剂组成、交联剂用量和单体类型对整体柱性能的影响。采用扫描电镜、氮吸附-脱附法和压汞法对其进行表征。结果表明,该整体柱具有微孔、介孔和大孔的三维孔结构,比表面积高达260.66m2g-1。将该整体柱作为高效液相色谱固定相对标准蛋白质的混合物、蜗牛酶、鸡卵清及人血浆等复杂生物样品进行了分离。结果表明,与基于甲基丙烯酸缩水甘油酯和苯乙烯的整体柱相比,本文制备的整体柱对于蛋白质具有更好的选择性。此外,本方法还能够避免人血浆中三种最高丰度蛋白质对于其他蛋白质的掩盖作用。通过液相色谱/质谱技术对人血浆蛋白质中的一些色谱馏分进行鉴定,结果表明,不同馏分中含有的蛋白质种类不同,表明该方法是一种有效的蛋白质分级分离方法,对于血浆蛋白质组学的后续研究,特别是对于探索新的疾病标志蛋白质和药物靶点的研究具有重要意义。