【摘 要】
：
研究背景:死亡相关蛋白激酶（DAPK）是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与多种细胞过程,如细胞凋亡和自噬等。DAPK可能作为肿瘤抑制因子或促癌基因,这主要取决于肿瘤类型及其下游信号网络。传统研究认为,DAPK主要通过p53途径诱导细胞的凋亡并参与细胞的自噬过程等来实现抑癌作用,在癌细胞中往往呈低表达或表达缺失。在肝细胞癌中DAPK表达下调,但在肝癌中DAPK的功能作用却鲜有研究。研究方法:通过CCK
论文部分内容阅读
研究背景:死亡相关蛋白激酶（DAPK）是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与多种细胞过程,如细胞凋亡和自噬等。DAPK可能作为肿瘤抑制因子或促癌基因,这主要取决于肿瘤类型及其下游信号网络。传统研究认为,DAPK主要通过p53途径诱导细胞的凋亡并参与细胞的自噬过程等来实现抑癌作用,在癌细胞中往往呈低表达或表达缺失。在肝细胞癌中DAPK表达下调,但在肝癌中DAPK的功能作用却鲜有研究。研究方法:通过CCK-8和SRB增殖实验、划痕实验和细胞侵袭实验,来探究DAPK表达量以及DAPK的下游基因DDX20的表达量对肝癌细胞功能层面的影响。通过Co-IP实验验证了DDX20可被泛素化介导的蛋白酶体途径降解,发生泛素化标记。通过质谱实验筛选出了DDX20基因潜在的特异性E3连接酶,然后设计这些E3的si RNA,瞬转到细胞中使其相对应的E3敲弱,检测DDX20的表达量,确定介导DDX20发生泛素化蛋白降解的特异性E3连接酶。实验结果:当DAPK表达量上升时,PLC/PRF/5肝癌细胞的迁移和侵袭被抑制,但对增殖没有明显的影响。通过细胞功能学实验发现,DAPK可通过DDX20抑制PLC/PRF/5肝癌细胞的侵袭和迁移。DAPK对DDX20的m RNA表达无影响,DDX20调控发生在蛋白降解层面。DDX20被特异性E3连接酶识别,进而被E3引导发生泛素介导的蛋白酶体降解。通过质谱分析筛选出E3的候选蛋白有四种,分别为UBR5、UBE3A、RBBP6和UHRF1。实验发现在UBR5和UBE3A表达被敲弱时,DDX20的表达量有明显上升,且在DAPK激酶活性被抑制情况下,UBE3A和UBR5的低表达可弥补DAPK因激酶活性缺失导致的DDX20蛋白不稳定现象,DAPK可保护DDX20免受UBE3A和UBR5介导的泛素化介导的蛋白降解,从而提升DDX20蛋白稳定性。实验结论:DAPK通过DDX20抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。DAPK通过调控UBR5和UBE3A介导的DDX20蛋白酶体降解来维持DDX20蛋白的稳定性。
其他文献
肿瘤作为一种严重威胁人生命健康的疾病,发病率和死亡率逐年攀升,已成为仅次于心血管疾病的全球第二大死亡原因。传统的肿瘤治疗手段有手术切除、放疗、化疗以及靶向治疗,近些年肿瘤免疫治疗快速发展,尤其细胞治疗和免疫检查点治疗领域的突破极大提升了肿瘤患者的治愈率和生存率。Zebularine是一种DNA甲基化抑制剂,通过去甲基化可以重新启动某些关键基因的活化,是肿瘤治疗领域的研究热点。本论文将zebular
牙齿作为颅颌面的重要组成部分,主要承担咀嚼功能,同时在保持脸部外形及面容美观、帮助发音等方面也发挥重要作用。牙齿发育依赖于外胚层来源的牙上皮和颅神经嵴来源的间充质之间的相互作用。其中,上皮或间充质组分须有一者具备诱导成牙潜能。在将来,想要利用基于干细胞的组织工程实现人类牙齿再生也应当遵循体内牙齿发育的原则,需要上皮与间充质源性的干细胞,同时需要其中之一具备诱导成牙潜能。目前为止,无论是牙源性间充质
恶性肿瘤已成为威胁人类健康的最严重疾病之一,世界上癌症的发病率正以每年3%至5%的速度增长。因此,恶性肿瘤的治疗是全球共同探讨的重大问题。光动力疗法（Photodynamic Therapy,PDT）是一种用于肿瘤治疗的新的微创技术。光动力疗法使用具有特定波长光激发癌细胞中的光敏剂,通过产生诸如单态氧的活性氧物质,从而杀灭癌细胞。激发光、光敏剂和分子氧是PDT的作用的主要要素,三者在同一时空相互作
乳腺导管癌是乳腺癌的重要分支之一,严重危害广大女性的生命健康。在临床,乳腺导管癌的早期阶段面临被高估或低估的风险。低估可能使患者从乳腺导管癌早期阶段发展为浸润性导管癌;高估,则可能使患者过度治疗。因此,提高乳腺导管癌早期诊断的精确性,是提高乳腺癌患者保乳手术的成功率和患者的生活质量的前提条件。最近三十年以来,无标记多光子显微成像技术广泛应用于生物医学成像上,其具有毫米级的光切片能力,并具有光毒性小
免疫治疗作为继肿瘤手术治疗、放化疗后的一种新的治疗方法,主要是通过活化淋巴细胞激活自身免疫系统,促使淋巴细胞能够识别并杀伤肿瘤细胞。近些年的肿瘤治疗中,通过激活T细胞免疫治疗受到强烈的关注,免疫检查点蛋白PD-1特异性单克隆抗体通过阻断肿瘤免疫逃逸,改善免疫应答显示出较好的肿瘤治疗效果,这表明免疫检查点抑制剂的癌症免疫疗法是有效的治疗方法之一。随着PD-1单抗出现耐药性,越来越多研究转向联合用药,
乳腺癌是女性中最常见癌症之一。全球每年约有210万新发病例,其中由于乳腺癌致死亡人数也有100多万人。由于区域文化、经济发展情况、医疗水平等多方面差异,在不同地区乳腺癌发生年龄、癌症诊断时期、患者生存情况等均出现巨大差异。中国有着世界五分之一的人口数,中国乳腺癌新发病例占全世界乳腺癌的12.2%,以及9.6%的死亡率。与此同时,在中国大多数乳腺癌患者初次发现时,癌症已经进入晚期状态。纵观全球随着医
当前,全球女性恶性肿瘤发病率卵巢癌位居第二,死亡率在妇科肿瘤中位居首位,卵巢癌的致病原因复杂,开始得病时无明显特征,目前现有的医疗条件也无法检测早期患者,因此研究广泛用于筛查早期卵巢癌的检测方法更加紧迫和重要。近年来,金纳米材料在生物医学应用中的研究引起人们的广泛关注。在较多金纳米材料中,金纳米棒以其独特的化学物理性质和简单的制备工艺,在医学成像、光热治疗、生物检测等众多生物医学领域具有很高的应用
胃癌是消化系统中比较常见的恶性肿瘤之一,严重威胁着人类的生命安全。胃癌的早期发现和早期治疗是决定胃癌生存率十分重要的一个步骤,对患者的手术选择以及预后的影响都十分大。由于内窥镜技术的普及,早期胃癌的检出率提高了,准确的术前诊断是推动早期胃癌的个体化治疗进展的关键。本研究基于多光子显微成像技术,探讨正常胃癌与早期胃癌的区别,进一步研究不同粘膜下浸润深度与早期胃癌胶原信号的定量关系。正常组织和异常组织
肝癌是一种发生在肝脏上的恶性肿瘤,目前主要的治疗方式是手术切除,但是预后较差易发生转移和复发。本研究以Hep3B肝癌细胞作为研究对象,希望从Hep3B肝癌细胞整体水平研究翻译后修饰对其蛋白及功能的影响。蛋白质翻译后修饰（PTM）主要形式包括泛素化、SUMO化、磷酸化等,泛素化的经典途径是介导蛋白质经26S蛋白酶体降解,SUMO化修饰可以调节蛋白的稳定性、亚细胞定位等。SUMO化修饰与泛素化修饰过程
近年来,A股市场财务舞弊事件频发,有在上市前开始实施财务舞弊的公司,也有在上市后出现财务舞弊行为的公司。上市公司财务舞弊造成的影响是多方面的,既包括上市企业自身,也包括广大的投资者、中介机构、监管部门等。党的十九大指出,必须进一步深化金融体制改革,促进资本市场健康有序发展,健全对金融领域的监管。因此,全面分析财务舞弊行为和舞弊公司的特点,综合考虑如何识别和预防财务舞弊不仅是政府监管部门的重要研究课