吐白水软化病是柞蚕一种重要的病害,通常发病于辽宁,吉林,黑龙江等天气寒冷的地区。柞蚕患病的机率约为30%,在严重的地域甚至可以超过70%。研究发现,柞蚕Iflavirus病毒(ApIV)是柞蚕吐白水软化病的病原之一,是小RNA病毒科一株单正链RNA病毒。小RNA病毒科病毒的3C蛋白酶具有高度保守的活性位点。3C蛋白酶在病毒复制中有前体蛋白切割的功能,且在宿主细胞内没有同源位点,常被选为研制抗小RNA病毒抑制剂的靶标。对3C蛋白酶已经进行了长期的大量的研究,但是还没有针对ApIV 3C蛋白酶抑制剂的研究。在本论文中,通过同源建模以及分子动力学的方法构建了ApIV 3C蛋白酶的三维结构,通过基于分子对接的虚拟筛选,从含3500多个分子的天然产物数据库中筛选出15个候选化合物,通过体内外的病毒抑制实验,获得异黄酮类化合物Orobol,发现其具有良好的抗ApIV病毒活性。体内实验结果表明,随着Orobol浓度的升高,其抑制病毒复制率越高,当Orobol的浓度达到10μg/ml时,抑制病毒复制率达到80.5%,并且在此浓度下,细胞毒性造成的细胞活性的降低仅为3.42%,细胞毒性低。体内实验通过观察蚕蛹的颅顶板颜色的变化观察蚕蛹感染ApIV的情况,结果表明,阴性对照组蚕蛹的颅顶板呈白色,阳性对照组蚕蛹的颅顶板呈黑色,不同剂量Orobol处理注射ApIV病毒的蚕蛹,随着注射的Orobol的剂量的升高,颅顶板的颜色逐渐变浅,体内实验验证了Orobol有抗ApIV病毒活性。从而发现了一个ApIV 3C蛋白酶的先导化合物。研究了阿维链霉菌NRRL8165的摇瓶发酵条件后,利用该菌株通过生物转化获得了Orobol。在动力学模拟与分子对接水平上研究了Orobol与ApIV 3C蛋白酶的相互作用模式,结果表明Orobol稳定地结合于ApIV 3C蛋白酶的结合口袋处。从而发现了一个新的ApIV 3C蛋白酶的抑制剂。对Orobol运用Discovery Studio(DS)中的基于反应的原位生长进行修饰,共得到6个化合物,使用分子动力学模拟(Molecular dynamics simulation,MD)验证,结果表明:修饰的化合物比Orobol有更低的蛋白-配体相互作用能,结合更为紧密。