【摘 要】
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目的:探讨三基序蛋白8(Tripartite motif 8,TRIM8)对高糖高游离脂肪酸(High glucose and High free fatty acid,HGHF)诱导的小鼠心肌细胞(Mouse cardiomyocytes,MCMs)凋亡的影响及机制。方法:将MCMs分为四组:正常糖(葡萄糖浓度:5.5 mmol/L,Normal glucose group,NG)组,高糖(葡萄
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目的:探讨三基序蛋白8(Tripartite motif 8,TRIM8)对高糖高游离脂肪酸(High glucose and High free fatty acid,HGHF)诱导的小鼠心肌细胞(Mouse cardiomyocytes,MCMs)凋亡的影响及机制。方法:将MCMs分为四组:正常糖(葡萄糖浓度:5.5 mmol/L,Normal glucose group,NG)组,高糖(葡萄糖浓度:33 mmol/L,High glucose group,HG)组,高游离脂肪酸(软脂酸钠浓度:300 μmol/L,High free fatty acid group,HF)组,高糖高游离脂肪酸(葡萄糖浓度:33 mmol/L,软脂酸钠浓度:300 μmol/L,HGHF)组;使用特异性siRNA敲减MCMs中TRIM8的表达水平后,再将MCMs分为Control(予以转染试剂干预)组、Scra siRNA/PBS(予以非特异性阴性Scramble siRNA及转染试剂干预)组、TRIM8 siRNA/PBS(TRIM8特异性siRNA及转染试剂干预)组、Scra siRNA/HGHF 组、TRIM8 siRNA/HGHF 组;为寻找 TRIM8 在 HGHF 致MCMs损伤中的可能作用机理,将MCMs分为HGHF/DMSO组、HGHF+TRIM8 siRNA+DMSO(HGHF+Ts/DMSO)组、HGHF/ML385 组和HGHF+TRIM8 siRNA+ML385(HGHF+Ts/ML385)组,采取流式细胞术检测MCMs凋亡率,DHE染色法以及流式细胞术检测MCMs中活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的含量;qPCR 及 Western blot 检测MCMs 中 TRIM8、Nrf2、Gclc、Ho-1、Nqo-1 的含量。结果:HGHF可增加MCMs中TRIM8的表达,减少Nrf2及Gclc、Ho-1、Nqo-1等抗氧化物质的表达(P<0.05),进一步研究发现,与Scramble siRNA/HGHF 组相比,TRIM8 siRNA/HGHF 组内 MCMs 的 ROS含量和凋亡率减少(P<0.05),相应的,Nrf2、Gclc、Ho-1、Nqo-1等抗氧化物质的表达增高。与此相反,在此基础上加用Nrf2抑制剂ML385能够部分逆转下调TRIM8后对高糖高游离脂肪酸致MCMs凋亡的抑制作用(P<0.05)。结论:TRIM8通过调节Nrf2抗氧化途径加重高糖高游离脂肪酸致小鼠心肌细胞凋亡。
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