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同步荧光技术具有简化谱图、减少光散射、提高选择性等优势,适合于多组分混合物的分析。该技术近几年与具有较好“数学分离”功能的化学计量学方法相结合,能更好地以“光谱分辨”结合“数学分离”克服多组分体系中光谱严重重叠这一难题,从而在复杂体系的解析中得到越来越广泛应用。本论文致力于发展简便快速,并能同时测定血液中多种卟啉的同步荧光分析方法,通过结合导数技术消除基体干扰或化学计量学方法来解决多重共线问题。论文分为四章:
第一章是文献综述。首先介绍卟啉作为生物标志物的应用价值以及卟啉的分析方法;然后阐述了同步荧光法的理论基础、发展和应用以及同步荧光技术结合化学计量学方法研究进展;最后提出了本论文的研究设想。
第二章综合考察荧光强度,稳定性及萃取全血中卟啉的可行性等影响因素,得出N,N-二甲基甲酰胺是一种非常稳定的且能用于测定全血中卟啉的新型溶剂的结论。利用该溶剂萃取全血中的卟啉,建立了同时测定全血中痕量锌原卟啉和原卟啉的三维荧光-交替三线性分解算法和导数恒基体同步荧光法,并考察了两种方法的检测限、精密度和加标回收率。实际全血中两种方法的平均回收率:前者为(82±9)%,后者为(85±10)%,且两种方法测定20份全血样时获得的相关性良好。
第三章提出了非线性可变角同步荧光技术结合偏最小二乘法来同时分析全血中的原卟啉、尿卟啉和粪卟啉。该法一次光谱扫描只需30s,简便快速。三种卟啉的检测限依次为:0.40、0.20和0.15nmol/L。实际全血样中的平均回收率分别是原卟啉(86.5±4.2)%,尿卟啉(89.6±2.3)%和粪卟啉(89.8±3.9)%。
第四章建立了一种同时测定超微量血细胞中原卟啉、粪卟啉和锌原卟啉的导数恒基体-非线性可变角同步荧光法。该法一次光谱扫描就能同时分辨出光谱严重重叠原卟啉、粪卟啉和锌原卟啉,并且三者的检测限依次为:0.58、0.21和0.05nmol/L。实际血细胞中的平均回收率分别是原卟啉(82.5±9.1)%,粪卟啉(83.5±7.8)%和锌原卟啉(89.2±13)%。将所建立的导数恒基体-非线性可变角同步荧光法用于20份血细胞样品的测定,测得的总原卟啉的含量与传统荧光法的测定结果相关性良好。