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食源性病毒是引起食源性疾病的主要原因之一。据WHO统计,发达国家每年约有30%的人口患食源性疾病,而在发展中国家每年患腹泻及相关疾病的患者约有2.7亿,导致240万5岁以下儿童死亡。轮状病毒(Rotavrius, RV)、诺如病毒(Norovirus, NV)和甲型肝炎病毒(Hapatitis A virus,HAV)是三种常见的食源性病毒,主要通过粪—口途径在人与人之间传播,水和食品污染病毒是它们最主要的传播方式。轮状病毒、诺如病毒和甲型肝炎病毒均为RNA病毒。目前世界上对这三种病毒的检测方法主要为电镜法、ELISA法和RT-PCR法。但由于电镜法价格昂贵,对环境及操作人员要求较高；ELISA的灵敏度不及RT-PCR,使得RT-PCR成为目前检测轮状病毒、诺如病毒和甲型肝炎病毒的“金标准”。本研究通过建立RT-PCR扩增与反向斑点杂交检测相结合的方法,实现对三种病毒的同步检测,即在RT-PCR扩增之后利用反向斑点杂交方法对结果进行检测。该方法不但能有效提高检测灵敏度、降低“假阳性”风险,且检测方法无需任何仪器、价格低廉、检测结果肉眼可见,可用于对食品、粪便的快速定性筛查。论文主要研究内容及结果如下：(1)采用QIAamp Viral RNA Mini Kit试剂盒法对病毒RNA进行提取。以GII型诺如病毒的RNA依赖性的RNA聚合酶基因(RdRp)、轮状病毒的A组内衣壳蛋白VP6基因和甲肝病毒的VP1～VP3结构蛋白基因为扩增对象,建立RT-PCR同时扩增这三种病毒的方法。通过对扩增反应中引物浓度、退火温度及循环数的优化得到RT-PCR同时扩增RV、NV和HAV的最佳反应条件。并测得在此条件下利用琼脂糖凝胶电泳法分析扩增结果的最低检测限为：279.3pg (RV)、93.7pg (NV)、117.3pg (HAV)。(2)回收轮状病毒、诺如病毒和甲肝病毒的RT-PCR扩增产物,经纯化后用于构建重组质粒pGEM-RV、pGEM-NV、pGEM-HAV。利用PCR及测序方法对克隆产物进行检验分析,并将克隆产物作为模板用于反向斑点杂交优化试验中。(3)通过对反向斑点杂交反应过程中杂交膜、碱性磷酸酶的稀释度、RT-PCR产物加入量、紫外交联时间、预杂交时间、杂交时间、杂交后洗膜时间及温度、酶促反应时间、酶促后洗膜时间和杂交温度的探索及优化建立了反向斑点杂交技术同时检测轮状病毒、诺如病毒和甲肝病毒的方法。通过灵敏度试验得到该方法同时检测RV、NV、HAV的最低检测限。RV与NV的最低检测限分别为27.93pg和9.37pg,高于RT-PCR凝胶电泳法10倍；HAV的最低检测限为1.173pg,高于RT-PCR-凝胶电泳法100倍。且杂交稳定性、特异性良好,无交叉反应。(4)采集7份临床样本对本研究所建立的RT-PCR-反向斑点杂交法的有效性进行了验证,并与RT-PCR-凝胶电泳法进行对比。结果表明,RT-PCR-反向斑点杂交法对于RV、NV和HAV三种食源性病毒的检测可靠有效,检测结果与RT-PCR-凝胶电泳法一致,其中6份样本呈阳性,1份样本未检出,且反向斑点杂交检测方法的灵敏度显著高于RT-PCR-琼脂糖凝胶电泳法。