[目的]缺血性脑卒中是一类发病率高、致残率高、致死率高的神经系统疾病。目前最理想的治疗方法是通过清除血栓使得血流再通给予大脑重新血供和氧供,但是仍有再灌注损伤。本实验通过后适应处理明确后适应作用对大鼠脑缺血再灌注中自噬相关因子的影响以及潜在的调节机制。[方法]1.线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO模型)。根据缺血再灌注组、缺血后适应组、缺血后适应联合3-甲基腺嘌呤组、缺血后适应联合雷帕霉素进行相关的处理,并且在不同的时间点进行神经功能缺损评分以及取材。2.应用TTC染色对大鼠大脑进行染色,评估梗死面积。3.Western blot检测大鼠大脑组织中自噬相关因子LC3Ⅱ以及Beclin1的表达水平,研究不同缺血再灌注时间、不同缺血后适应时间点自噬相关指标的变化,以及3-甲基腺嘌呤和雷帕霉素处理后对自噬相关因子的影响。4.免疫组化检测大鼠大脑组织中自噬相关基因ATG5、ATG7的表达水平,研究不同缺血再灌注时间、不同缺血后适应时间点自噬相关指标的变化,以及3-甲基腺嘌呤和雷帕霉素处理后对其的影响。[结果]1.成功建立大鼠MCAO模型后给予大鼠神经功能缺损评分后拔出线栓进行再灌注或者后适应处理后于取材前再一次进行神经功能缺损评分。随着再灌注时间的延长、神经功能缺损评分越来越高,神经功能缺损越来越严重。给予缺血后适应处理后可以有效减小神经功能缺损评分,减轻神经功能缺损,在后适应24小时时候保护作用最明显。后期给予后适应联合3-甲基腺嘌呤处理后可以进一步减轻神经功能缺损,后适应联合雷帕霉素处理可以抑制后适应的神经功能保护作用。2.脑梗死面积测定:大鼠新鲜脑组织进行TTC染色,白色区域为脑梗死组织,红色区域为正常供血区。在24小时的时候,缺血后适应可以有效减小脑梗死面积(p<0.05),后适应联合3-甲基腺嘌呤处理后与单独后适应处理比较能够进一步减小脑梗死面积(p<0.05)。后适应联合雷帕霉素处理后与单独后适应处理后比较增加了脑梗死面积。3.Beclin1和LCⅡ的表达结果:利用Western blot检测大鼠脑组织中Beclinl和LCⅡ的表达水平,缺血再灌注及缺血后适应均可以使大鼠脑组织中的Beclin1和LCⅡ的表达增加(p<0.05)。后适应24小时能够有效抑制Beclin1和LCⅡ的表达(p<0.05),应用3-甲基腺嘌呤后可以进一步抑制Beclin1和LCⅡ的表达(p<0.05)。雷帕霉素可以逆转后适应对自噬的抑制作用,增加Beclin1和 LCⅡ的表达(p<0.05)。4.ATG5和ATG7的表达结果:利用免疫组化检测大鼠脑组织中ATG5和ATG7的表达,缺血再灌注及缺血后适应均可以使大鼠脑组织中的ATG5和ATG7的表达增加(p<0.05)。后适应3小时能够抑制ATG5的表达(p<0.05)。后适应24小时能够有效抑制ATG7的表达(p<0.05),应用3-甲基腺嘌呤后可以进一步抑制ATG5和ATG7的表达(p<0.05)。雷帕霉素可以逆转后适应对自噬作用的抑制作用,增加ATG5和ATG7的表达(p<0.05)。[结论]1.在该实验中,随缺血再灌注时间的延长,神经功能缺损进行性加重。2.缺血再灌注可以激活细胞的自噬作用,使得Beclin1、LC3Ⅱ、ATG5、ATG7的表达水平升高。3.缺血后适应处理能够抑制缺血再灌注引起的神经系统损伤。4.缺血后适应处理可以有效抑制细胞的自噬作用,可以有效抑制Beclin1、LC3Ⅱ、ATG5、ATG7的表达水平,但是不同时间段有差异性表现。5.应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤后可以加强后适应的神经功能保护作用,减小脑梗死面积、减轻神经功能缺损,进一步抑制细胞自噬作用。6.应用自噬激动剂雷帕霉素后可以抑制后适应诱导的神经功能保护作用。