n-3多不饱和脂肪酸作为细胞构成的重要成分,一直以来受到人们的广泛关注。研究表明,哺乳动物体内一定量的n-3多不饱和脂肪酸含量,可以起到预防心血管疾病、神经退行性疾病甚至癌症的作用。但n-3多不饱和脂肪酸在大多数动物体内不能合成,只能从食物中补充。fat-1基因的发现改变了这一现状,它可以将多不饱和脂肪酸从n-6形式转化为n-3形式,并发挥功能。研究人员已经利用转基因的方法制备了能够表达fat-1基因的转基因动物,如:小鼠、猪等,为研究n-3多不饱和脂肪酸的功能提供了高效、准确的医学、营养学动物模型。随着人们对n-3多不饱和脂肪酸认识的增加,对富含这一成分的食品需求也大大增加,fat-1基因在生产特殊农产品方面也具有十分大的潜力,亟待我们开发利用。本实验采用经密码子优化了的线虫基因sfat-1,使用脂质体转染的方法获得转sfat-1基因荷斯坦奶牛细胞,并将其应用到克隆研究中。实验中通过PCR-酶切连接方法人工合成了sfat-1基因,并构建了基于真核表达载体pCDNA3.1(+)的转基因载体pCDNA3.1(+)-sfat-1-EGFP及阴性对照载体pCDNA3.1(+)-EGFP;利用阳离子脂质体转染法,对自建8079TE细胞系进行转基因操作,经过G418筛选获得阳性转基因细胞,经PCR、RT-PCR检测证明外源基因已整合进入细胞基因组内。作为阶段性成果,本实验构建的pCDNA3.1(+)-EGFP对照载体为实验室后来转基因研究提供了良好的对照;建立的8079TE细胞系可以为多种基因的转基因克隆提供良好供体;筛选获得的转sfat-1基因细胞为后期n-3多不饱和脂肪酸细胞水平生物学研究及转sfat-1基因克隆牛研究奠定了基础。