第一部分肿瘤坏死因子-α参与颅内动脉瘤发病的调控目的本研究的目的是研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)多态性与颅内动脉瘤的关系,并探索动脉瘤的发病机制。方法调查研究中国人群中TNF-α基因表达的遗传变异与颅内动脉瘤发生之间的关系。通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析了 192个颅内动脉瘤病例和112个对照组的TNF-α-3959 T>C(rs1799964),4127 C>A(rs1800630),4133C>T(rs1799724),4184C>T(rs4248158)和 4752G>A(rs361525)。检测了患者和对照组之间等位基因频率的差异。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),比较颅内动脉瘤病患和正常对照组中TNF-α表达量的差异。通过免疫组化,比较颅内动脉瘤壁和对照组(肾动脉和颞浅动脉)中弹性蛋白的不同;分析颅内动脉瘤壁TNF-α阳性细胞数量和分布的差异。结果IA 组与对照组 4127C>A(P=0.072),4133C>T(P=0.373),4184C>T(P=0.749)和4752G>A(P=0.184)基因型频率差异无统计学意义。但是TNF-α-3959 T>C等位基因变异频率在颅内动脉瘤组为90.6%,对照组为0.9%(P<0.01),T等位基因与颅内动脉瘤的发病密切相关。颅内动脉瘤病患和正常对照组RT-PCR比较TNF-α表达量有显著性差异。颅内动脉瘤病患和正常对照组免疫组化比较,动脉瘤壁TNF-α 阳阳性细胞数量明显增多,且分布不均匀。结论TNF-α-3959 T/C T等位基因与颅内动脉瘤的发病密切相关,发现一个新的颅内动脉瘤发生相关位点。颅内动脉瘤破裂出血患者与对照组比较TNF-α表达增高。TNF-α阳性细胞分布非常不均匀,在瘤壁薄弱处非常密集,而瘤壁厚实处几乎无阳性细胞所见,此分布特点与颅内动脉瘤破裂出血有关。第二部分p22phox-214T/C变异对颅内动脉瘤的影响目的研究p22phox-2 14T/C的基因遗传变异对NADPH表达量产生的影响,以及与中国人群颅内动脉瘤发生之间的关联。方法我们的实验采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析192例颅内动脉瘤患者和112例正常对照组p22phox-2 14T/C基因的多态性。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析NADPH的mRNA。通过酶联免疫吸附测定(ELISA)验证RT-PCR的实验结果。随机挑选6名IA患者通过RT-PCR检测TNF-α、SOD、NADPH和GAPDH内参的表达情况。通过免疫组化,比较颅内动脉瘤壁和颞浅动脉对照组中p22phox阳性细胞数量的差异。结果在临床病例中,在颅内动脉瘤组中,p22phox-214C>T等位基因频率为86.9%,而对照组为23.53%,颅内动脉瘤组p22phox-214T/C等位基因变异频率与对照组比较有显著差异(P<0.001)。与p22phox-214T>C单核苷酸变异结果相一致,颅内动脉瘤组NADPH的mRNA表达显著高于对照组。ELISA检测结果显示,颅内动脉瘤组血清NADPH水平显著高于对照组(P<0.0001)。颅内动脉瘤破裂出血后SOD和NADPH较TNF-α明显增高,氧化应激产物表达增高比炎症相关产物更加明显。颅内动脉瘤病患和正常对照组免疫组化比较,动脉瘤壁p22phox阳性细胞数量基本相同,均极少分布。结论p22phox-214C>T单核苷酸变异影响NADPH的表达和颅内动脉瘤形成;NADPH促进颅内动脉瘤的发病。氧化应激在IA患者破裂出血中起重要作用,氧化应激产物比炎症相关产物表达增高更加明显。p22phox对颅内动脉瘤的影响与炎性因子不同,可能是通过外周血液中NADPH的增高来影响颅内动脉瘤的形成。第三部分评估比较三种弹性蛋白酶诱导兔颈总动脉动脉瘤的方法目的临床上常用大耳白兔制造动脉瘤模型。本研究分析比较了三种制造兔颈总动脉动脉瘤的方法,旨在探索一种简单、安全、有效的方法来制造弹性蛋白酶诱导的动脉瘤。方法42只日本大耳白兔采用弹性蛋白酶灌注的方法制造大耳白兔右颈总动脉(rightcommon carotid artery,RCCA)动脉瘤模型。将42只成年雄性日本大耳白兔(3.05±0.65kg)随机分为3组:RCCA起始部用药组(A组n=12),RCCA中间用药组(B组n=18),RCCA结扎用药组(C组n=12)。A组:将RCCA的起始部用一个临时动脉瘤夹阻断,约2厘米处再使用一个临时动脉瘤夹阻断造成一残腔,残腔采用弹性蛋白酶灌注消融20分钟,取下动脉瘤夹。B组:用A组的方法处理中段的RCCA。C组:用B组的方法处理中段RCCA,然后结扎远端RCCA。在动脉瘤模型创建3周后进行彩色多普勒超声检查,采集动脉瘤囊内血流的测量结果。在处死动物之前,进行血管造影检查。动物处死后取动脉瘤组织进行组织学分析,SMA-αu CD31、CD34、CD68、collagen Ⅳ、Ki67等相关指标与人颅内动脉瘤标本作比较。结果通过与人颅内动脉瘤标本比较,三种方法均成功建立了弹性蛋白酶诱导的动脉瘤模型。组织学研究显示生物特征与人颅内动脉瘤以及先前公开的弹性蛋白酶诱导的兔动脉瘤模型相似。A组与B组形态相同,但A组死亡率高于B组。B组与C组形态不同,C组诱导型动脉瘤与人颅内动脉瘤更相似,但是C组死亡率高于B组。结论通过分析比较,证明了 B方案是最为简单、安全、有效的建模方法,该方案建立的动脉瘤模型可以用于动脉瘤机制相关的基础研究。我们为动脉瘤相关基础研究工作提供了一种新的、有效的方法。第四部分高迁移率族蛋白-1在颅内动脉瘤形成中的作用目的研究高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)在破裂的人颅内动脉瘤壁和血浆中的表达情况,并在大耳白兔颈总动脉瘤模型中验证临床实验结果,探索HMGB-1对颅内动脉瘤形成的作用和机制。方法使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附测定(ELISA)分析192颅内动脉瘤病例和112例对照组中HMGB-1的表达量。在大耳白兔颈总动脉瘤模型中通过RT-PCR和ELISA检测HMGB-1的表达量。通过分析比较人颅内动脉瘤壁免疫组化结果,验证RT-PCR和ELISA结果,并推导相互之间的关联。结果HMGB-1在颅内动脉瘤组与对照组比较中有显著性差异(P<0.001)。通过兔颈总动脉瘤模型相关指标的检测,明确动物模型与人类颅内动脉瘤有类似的结果。HMGB-1的免疫组织化学结果同样显示颅内动脉瘤组与对照组之间存在显著差异。结论HMGB-1的表达在动脉瘤壁分布不均匀,与TREM-1和TNF-α的阳性细胞表达特点高度一致,可能几种炎症介质协同作用,影响动脉瘤的发生和破裂出血。HMGB-1与中国人群中的颅内动脉瘤破裂出血有关,HMGB-1是颅内动脉瘤发病的重要因素,HMGB-1有望是预防颅内动脉瘤血管破裂新的治疗靶点。第五部分依达拉奉干预大耳白兔颈总动脉梭形动脉瘤的作用目的通过依达拉奉干预大耳白兔颈总动脉梭形动脉瘤的疗效观察,进一步验证P22phox在颅内动脉瘤形成中的作用,确定氧自由基清除剂-依达拉奉对颅内动脉瘤形成的影响。方法建立大耳白兔动脉瘤模型,将这些大耳白兔随机分为三组:依达拉奉组(Edaravone 2 mg/kg/d,n=18),对照组(生理盐水,4 mL/d,n=18)和正常组(正常兔,n=10)。从动脉瘤制备后7天开始至21天,将依达拉奉或生理盐水每天两次耳缘静脉内注射给大耳白兔,连续给药14天。行H&E染色和CD34免疫组化染色,了解病变细胞内膜、成分改变情况。使用EDTA作为抗凝剂收集大耳白兔的血浆,通过ELISA检测血浆中待测因子的含量:具体为肿瘤坏死因子α(TNF-α)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、3-硝基酪氨酸(3-NT)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)、髓细胞触发受体-1(TREM-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢(H202)。结果依达拉奉组动脉瘤模型的成功率为62.5%,低于对照组的82.3%;动脉瘤直径小于对照组(3.26±0.13mm vs 3.85±0.07mm)。在动物动脉瘤模型中依达拉奉抑制动脉瘤发展;依达拉奉组血清MMP-9 水平较对照组显著降低(P<0.05),但依达拉奉组血清MMP-2水平与对照组比较差异无统计学意义(P=0.7544)。依达拉奉组血清TNF-α、HMGB-1和TREM-1 水平较对照组显著降低(P<0.05),其他指标无显著差异。依达拉奉治疗后H202和SOD两项指标较动脉瘤对照组和正常对照组均无显著差异,3-NT和NADPH两项指标依达拉奉治疗组和正常对照组有明显差异,但是与动脉瘤对照组无显著差异。结论依达拉奉主要不是通过调节氧化应激相关物质的产生来调控颅内动脉瘤的发病,主要通过影响炎症相关因子的表达来对颅内动脉瘤产生影响,氧化应激相关产物与炎症相关因子对颅内动脉瘤的产生有协同作用。依达拉奉能够抑制动脉瘤的生长,具体机制可能通过调控TNF-α、HMGB-1和TREM-1等炎症相关因子来实现。本研究能够为将来颅内动脉瘤治疗相关药物的研发提供支持和方向。