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植物病害一直是农业生产的主要限制因子之一。芜菁花叶病毒(TuMV)作为重要植物病毒之一,广泛分布于世界各地,根据28个国家和地区的病毒病调查,TuMV已经成为仅次于黄瓜花叶病毒(CMV)的侵染大田蔬菜的最重要的病毒。TuMV是我国十字花科蔬菜病毒病害的主要病原,分布广,危害大,给我国的十字花科作物生产造成重大的经济损失。鉴于该病毒在经济上的重要性,我国对该病毒的研究较多。 由于植物抗病性的机理十分复杂,且人们对植物与病原互作机制的认识也有限,而常规育种途径本身存在一定局限性,因此植物抗病育种一直是农业生产上的重大难题。在最近几年,人们克隆到了多个植物抗病基因,使寄主与病原相互作用的分子机理研究得到了迅速的发展,为抗病基因在生产上的应用进行了有益探索,并展示了其美好的前景。 本研究利用实验室已搜集到的芥菜种质资源,通过分子生物学的手段,克隆抗性相关的基因,经过Northern杂交检测和病毒接种后的病情调查以及EALAS测定的验证,希望能以此获得一种快速鉴定芥菜对芜菁花叶病毒抗性的分子方法,并为下一步的研究奠定基础。 我们以来自浙江、上海和四川等省市的18个芥菜品种资源为实验材料,通过PCR扩增,在田间自然抗性表现较强的品种中获得一个641bp的特异性条带。根据此特异性条带与各个芥菜品种对芜菁花叶病毒抗性的相关性,我们初步推测,该片断与芥菜对芜菁花叶病毒的抗性相关。我们根据特异性片断的测序结果设计两端引物,通过RACE的方法克隆得到1039bp的基因序列。通过在NCBI上比对后发现,没有与目的序列的同源性大于50%的基因序列。 在抽提各供试材料的RNA后,通过RT-PCR初步检测和Northern杂交的进一步鉴定我们发现,在3号、5号、6号、7号、10号、11号和13号品种中,该基因序列有表达;而在其它供试品种中,该基因序列不表达。这与田间表现的自然抗性情况、温室摩擦接种后的病情调查情况以及接种后ELISA的检测情况基本一致。即在抗性较强的芥菜品种中,该基因序列高表达,植株表现为高抗、抗病或者耐病;而在抗性较弱或者感病的品种中,该基因序列低表达或者不表达,