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随着全球气候变暖的趋势越来越严重，高温对作物的危害已日益受到人们的重视。水稻作为一种原产热带和亚热带的喜温作物,其各个生育阶段都有一定的适宜温度范围,当气温超过这个范围时,就不利于其生长发育,会对水稻的生长发育和产量、品质形成过程造成较严重的危害。 miRNA属于动物和植物中存在的一类最小的功能ncRNA，通过与靶mRNA上特异的互补位点结合而在转录后水平抑制基因的表达。有些miRNA显示出在组织细胞的不同发育期或不同组织类型的严格特异性模式表达，而另一些miRNA在生物体中广泛表达。相关研究表明，miRNA参与植物拟南芥花器官发育和开花调控的过程，而温度对于水稻抽穗时期的影响也是至关重要的。因此对水稻高温胁迫相关研究也就变得迫切需要。 应用二代测序的方法，比较水稻抽穗开花时期的组织中 miRNAs的表达差异情况，找出有差异表达的miRNA，通过qRT-PCR验证某个具有显著差异的miRNA的表达情况。具体步骤如下： （1）对照组以及经高温胁迫的处理组混和样品两个实验样品作为实验材料，应用Ion Proton平台(ABI)分析miRNA的表达差异，过程包括从组织样RNA提取、文库构建、滴定和测序平台上进行测序、并使用相关的数据分析软件，得到有23个差异表达的miRNA。 （2）对照组和高温胁迫处理组的样品分别提取总RNA，并逆转录成cDNA进行后续的实验。根据miRNA数据库和相关文献，设计引物，采用qRT-PCR方法验证Osa-miR159c、Osa-miR159d、Osa-miR159f、Osa-miR156c-3p、Osa-miR167c-3p、Osa-miR164d、Osa-miR529b、Osa-miR528-5p、Osa-miR166b-3p、Osa-miR166h-3p在高温胁迫下水稻开花时期的表达差异情况。