蒙古族不同龋敏感儿童变形链球菌产酸耐酸及耐酸因子遗传多态性研究

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目的:通过对内蒙古包头地区蒙古族不同龋敏感儿童口腔中变形链球菌培养分离,分析蒙古族高龋和无龋儿童口腔中变形链球菌产酸、耐酸能力的差异及其耐酸因子遗传多态性。  方法:选取高龋和无龋180名蒙古族儿童为研究对象,无龋儿童取乳磨牙颊侧和高龋儿童取龋损区的牙菌斑,均用PBS做10-1、10-2、10-3稀释液体接种于轻唾-杆菌肽琼脂平板培养基,得到的分离菌株纯化后,采用细菌微量生化反应管检验菌株对甘露醇、山梨醇、蜜二糖、棉子糖、水解七叶苷和精氨酸的发酵能力,灭菌的生理盐水作阴性对照;用16sDNA方法分子水平上鉴定。确定的菌株进行产酸耐酸实验,高龋组和无龋组的菌悬液均按照菌液与液体培养基1:10(v/v)比例,加入到含5%蔗糖的不同PH值(以0.5为间隔,pH7.0-4.0)的BHI培养基中,厌氧条件下培养48h后,采用精密PH计测得培养后培养基PH值,计算培养前后的PH值的变化(△PH);将相同菌液浓度的变形链球菌临床分离株菌悬液分别按照菌液与液体培养基1:10(v/v)比例接种于不同PH值(以0.5为间隔,pH7.0-4.0)的BHI液体培养基中,厌氧条件下培养48h后,用紫外分光光度计测定540nm处吸光度A值,比较蒙古族不同龋敏感儿童口腔中变形链球菌产酸能力及生长情况。选取高龋组和无龋组的耐酸菌株,进行细菌DNA提取后,用特殊引物从细菌DNA中扩增uncD,采用限制性内切酶长度多态性和核酸测序比较突变位点。  结果:①蒙古族高龋和无龋儿童口腔中变形链球菌临床分离株的菌落形态和菌细胞形态无差异。②从180名蒙古族不同龋敏感儿童中,分离出40株变形链球临床分离株,高龋组21株和无龋组19株。③3-5岁蒙古族高龋儿童口腔中分离出的变形链球菌临床分离株的产酸和耐酸能力明显高于蒙古族无龋儿童口腔中分离出的变形链球菌,初始PH值为5.5和PH值为5时,蒙古族儿童高龋组与无龋组产酸能力比较均具有统计学意义(P<0.05);在初始PH值为4.5条件下,高龋组与无龋组菌株的生长均受到抑制,同时具有统计学意义(P<0.05)。④蒙古族儿童口腔中变形链球菌耐酸因子uncD的基因型,在限限制性内切酶Alu作用下出现A、B两组基因型,制性内切酶Hinf作用下有一种基因型,A、B两种基因型在高龋和无龋中的构成比具有统计学意义(P<0.05)。  结论:①蒙古族儿童口腔中变形链球菌菌落形态和菌细胞形态与以往研究结果一致。②蒙古族高龋儿童口腔中变形链球菌临床分离株具有高致龋性。③蒙古族儿童口腔中的变形链球菌耐酸因子具有遗传多态性,高龋组以B基因型居多,与龋病发生密切相关。
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