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目的：克隆NRF-1基因，并对NRF-1基因进行生物信息学分析，了解其基本结构和蛋白分子特征，及NRF-1与相关蛋白分子的作用关系，为后续研究NRF-1的功能及在心力衰竭的心肌细胞中作用机制提供实验支持和研究思路。构建NRF-1重组慢病毒，并感染大鼠心肌细胞（H9c2（2-1）细胞），然后筛选出稳定上调表达NRF-1的阳性转染H9c2（2-1）细胞，为今后研究NRF-1基因对衰竭心肌细胞的调节作用及后续的基因治疗打下基础。方法：1.NRF-1的生物信息学分析：通过在线软件EXPASY， PSSFinder，PSITE，SignalP，Swiss-model，STRING对NRF-1的氨基酸构成，蛋白质二级结构，蛋白质修饰位点，信号肽，三维结构，以及与相关蛋白之间的作用关系进行分析预测。2.NRF-1基因的克隆与鉴定：2.1NRF-1基因的克隆：通过生物合成与重叠延伸PCR技术克隆NRF-1基因，并重组于载体pMD18-T，然后转化至感受态大肠杆菌（E.coil DH5）；2.2NRF-1基因的鉴定：PCR及测序鉴定重组质粒NRF-1/pMD18-T序列正确性。3.构建NRF-1重组慢病毒与稳定上调表达NRF-1的H9c2(2-1)细胞：3.1NRF-1重组慢病毒的包装与滴度测定：将NRF-1基因重组至pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP载体，利用lipofectamine2000将重组载体pLenti6.3-NRF-1-IRES2-EGFP与两种包装质粒转入293T细胞中，包装成重组慢病毒，并测定病毒滴度；3.2NRF-1重组慢病毒转染H9c2（2-1）细胞的最适转染浓度测定：用阴性病毒液按梯度感染H9c2（2-1）细胞，选出合适的MOI值；3.3阳性转染H9c2（2-1）细胞的最适抗生素浓度测定：将重组慢病毒按选出的MOI值感染H9c2(2-1)细胞，然后用Blasticidin按浓度梯度筛选转染靶细胞，选出合适的筛选浓度；3.4阳性转染H9c2（2-1）细胞的鉴定：用抗生素按照最适筛选浓度持续筛选转染阳性的H9c2（2-1）细胞，获得稳定上调表达NRF-1的转染阳性靶细胞，经PCR，QPCR和Western blot鉴定转染阳性靶细胞的NRF-1表达量。结果：1.生物信息学分析表明NRF-1的蛋白质分子量为57280.1Da，等电点为5.28，分子式为C2498H3976N704O808S15，有534个氨基酸，其中46个碱性氨基酸，64个酸性氨基酸，148个极性氨基酸，191个疏水性氨基酸。有46(Arg+Lys)个带正电荷的残基，有64(Asp+Glu)个带负电荷的残基，不稳定系数为35.74，总的平均亲水系数为–0.334，说明NRF-1是稳定的亲水蛋白；NRF-1蛋白二级结构中α-螺旋和β-折叠较多，且分布均匀；NRF-1有2个糖基化位点，5个蛋白激酶C磷酸化位点，13个酪蛋白激酶II磷酸化位点，9个端酰基化位点，1个酰胺化位点，11个微体羧基端定位信号；STRING蛋白数据库分析显示NRF-1与10个因子具有不同程度相关性。2.重组质粒NRF-1/pMD18-T经测序鉴定，NRF-1基因序列与原始序列一致。3.构建出NRF-1重组慢病毒，病毒滴度是5.5×107TU/ml；重组慢病毒转染H9c2(2-1)细胞的合适MOI值为100；阳性转染H9c2（2-1）细胞的最适抗生素筛选浓度为3μg/ml；NRF-1重组慢病毒按MOI=100转染H9c2(2-1)细胞，经3μg/ml抗生素持续筛选后，获得稳定转染的H9c2(2-1)细胞，PCR鉴定结果显示慢病毒携带NRF-1插入靶细胞基因组，QPCR结果显示稳定转染组细胞的NRF-1的mRNA表达量比对照组细胞高2.25倍，Western blot结果显示稳定转染组细胞的NRF-1蛋白表达量比对照组细胞高1.28倍。结论：1.生物信息学分析NRF-1的氨基酸构成及蛋白分子特征，了解到NRF-1与相关蛋白分子的作用关系，以及这些因子的功能特点。2.成功克隆出NRF-1基因，并获得含有重组质粒NRF-1/pMD18-T的E.coilDH5。3.成功构建出NRF-1重组慢病毒真核表达体系。制备NRF-1重组慢病毒，并成功转染到H9c2(2-1)细胞中，经PCR，QPCR和Western blot鉴定细胞中NRF-1表达量，结果表明构建出上调表达NRF-1的H9c2(2-1)细胞，为后续研究NRF-1在心衰中的作用机制，对于能量代谢的调节作用，提供研究思路及实验基础。