鸡球虫病(Coccidiosis)是近年来限制养鸡业集约化发展的一类由艾美尔属(Eimeria)的9种球虫引起的寄生虫病。该病主要以肠道病变为主，可引起鸡消瘦、腹泻、拉血便，严重的可引起动物死亡，给养鸡业带来了巨大的经济损失。目前，各种抗球虫药物的使用依然是防治该病的主要措施，但是虫株对于药物的耐药性，以及对于禽类食品安全问题的的重视，人们开始寻找能够有效防治球虫病的方法。疫苗免疫不存在药物残留问题，而且安全高效。近几年，鸡球虫病的各种疫苗研究已逐渐引起研究人员的重视，并取得了一定的成果。　　正确的认识和掌握鸡球虫的生物学特性和抗鸡球虫的免疫保护机制，成为寻找更好的免疫保护抗原，研制免疫保护力强的鸡球虫病疫苗的重要前提，也是防治球虫病的的重要理论依据。　　本实验室已经从几种鸡球虫中获得多种抗原基因，，并成功构建了重组质粒。本试验在此基础上选取鸡堆型艾美尔球虫抗原3-1E、巨型艾美尔球虫抗原EM6、EM8和堆型艾美尔球虫抗原MIF进行了了重组表达，进而研究这四种重组蛋白体外对鸡外周血单个核细胞多种功能的影响。　　1.鸡球虫四种蛋白的表达及体外与鸡外周血单个核细胞的结合试验　　根据实验室构建的重组质粒，表达纯化3-1E、EM6、EM8和MIF四种重组蛋白，无菌采集鸡抗凝血，分离外周血单个核细胞，将重组蛋白以5μg/mL的浓度加入细胞悬液中，放置细胞培养箱内培养2h后收集细胞，应用免疫荧光抗体技术，激光共聚焦显微镜下观察检测发现重组蛋白EM8和MIF能够与鸡外周血单个核细胞结合，其余两种蛋白没有结合。　　2.鸡四种重组蛋白对鸡外周血单个核细胞细胞因子表达的影响　　根据GenBank中鸡IL-4、IL-17、IFN-γ和TGF-β的序列登录号设计合成符合荧光定量试验的PCR引物探针。以GAPDH为内参，用3-1E、EM6、EM8和MIF四种重组蛋白按浓度梯度分别刺激外周血单个核细胞后收集细胞提取RNA后合成cDNA为模板，进行荧光定量检测试验，分析细胞在不同浓度重组蛋白刺激后的细胞因子的 mRNA转录水平，结果发现，重组蛋白刺激单核细胞后，细胞因子IL4、IL/17D、IFN-γ和TGF-β4均有不同程度的变化，其中四组实验组的INF-γ的变化均比较显著(p＜0.05);另外，重组蛋白EM6、EM8可比较显著的引起四种细胞因子变化(p＜0.05)。　　3.鸡球虫四种重组蛋白对鸠外周血单个核细胞增殖的影响　　为了检测3-1E、EM6、EM8和MIF对鸡外周血单个核细胞的增殖作用，将不同浓度的重组蛋白分别与细胞共培养24小时后，利用CCK-8法检测增殖效果。结果发现，四种重组蛋白对细胞具有一定的刺激其增殖的作用。且在一定浓度下增殖情况比对照组差异显著(P＜0.05)，其中重组蛋白EM8和MIF在几个浓度梯度下的增殖情况均极显著高于对照组(P＜0.01)。　　4.鸡球虫四种重组蛋白对鸡巨噬细胞吞噬功能和分泌NO的影响　　为了检测重组蛋白3-1E、EM6、EM8和MIF对鸡的巨噬细胞功能的影响，本试验检测了巨噬细胞对中性红的吞噬能力，并测定了不同浓度重组蛋白作用巨噬细胞后细胞培养液中的NO浓度。试验结果表明，重组蛋白EM8和MIF均能够使巨噬细胞的吞噬功能和NO分泌功能增强，而其余重组蛋白产生效果并不明显　　5.重组蛋白EM8和MIF对鸡外周血T细胞和单核细胞的不同调节作用　　外周血单个核细胞有两个主要的亚群单核细胞和T细胞，它们在固有免疫和获得性免疫中发挥着重要作用。不同的蛋白分子对不同类型的细胞具有多种不同的调节作用。在本试验中，我们研究了重组蛋白EM8和3-1E对鸡外周血单个核细胞两个亚群细胞不同的调节作用。试验发现重组蛋白EM8和MIF均能够与单核细胞和T细胞表面结合，流式细胞技术发现两种蛋白均能够促进单核细胞MHCI、MHCⅡ类分子的表达，使单核细胞活化。