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背景/目的腹腔粘连(Intraperitoneal Adhesion,IA)是腹部外科手术中最具挑战性的问题之一,它的粘连密度、出现症状的时间间隔和临床表现各不相同,没有可预测的模式。如今粘连性疾病已经成为具有明显发病率,而无有效疗法的慢性医学疾病。尽管近年来外科手术技巧和防粘连药物取得了重要进步,但仍旧没有完全可靠的治疗策略。炎症和纤溶系统失衡是术后腹腔粘连形成的主要发病机制。巨噬细胞功能的改变可以调节炎症反应和胶原蛋白沉积,密切参与术后腹腔粘连的生理病理过程。JAK/STAT通路及其上下游信号是巨噬细胞极化激活的主要途径,导致巨噬细胞极化为不同的表型,M1型巨噬细胞(M1)分泌促炎细胞因子,M2型巨噬细胞(M2)分泌抗炎细胞因子,M1/M2的功能转换影响腹腔粘连的严重程度。活血通腑方能够有效防治腹腔粘连,由大黄、延胡索、桃仁、莱菔子、红花和芒硝组成,临床已运用二十余年,然而其作用于细胞的相关分子机制仍不完全清楚。因此,在本研究中,我们建立RAW264.7巨噬细胞炎症模型和大鼠腹腔粘连模型,明确活血通腑方是否通过调控巨噬细胞极化状态进而改善粘连,从细胞分子水平和动物整体水平分析活血通腑方调控SOCS/JAK2/STAT/PPAR-γ通路的情况,并深入分析了 PPAR-γ的活化与巨噬细胞极化状态的关系,为活血通腑方发挥抗粘连作用提供科学依据。方法细胞实验:①不同浓度活血通腑方含药血清(0、2.5%、5%、10%、20%、30%)刺激RAW264.7巨噬细胞24h,CCK-8法测定细胞活性;②RAW264.7巨噬细胞分别给予脂多糖(LPS)100ng/mL+干扰素(IFN)-γ 20ng/mL、白介素(IL)-4 20ng/mL、联合或不联合10%活血通腑方含药血清干预12h,流式细胞术检测M1/M2极化程度,ELISA法检测M1/M2相关细胞因子水平,Westernblot法检测SOCS/JAK2/STAT/PPAR-γ通路相关蛋白表达;③RAW264.7巨噬细胞分别给予脂多糖(LPS)100ng/mL+干扰素(IFN)-γ 20ng/mL、白介素(IL)-4 20ng/mL、10%活血通腑方含药血清,联合或不联合PPAR-γ激动剂罗格列酮(RSG)1 μmol/mL或抑制剂T0070907 1 μmol/mL,干预12h,流式细胞术检测M1/M2极化趋势和PPAR-γ核转位程度,ELISA法检测M1/M2相关细胞因子水平,Westemblot法检测SOCS/JAK2/STAT/PPAR-γ信号通路相关蛋白表达。动物实验:将40只SD大鼠随机分为假手术组、腹腔粘连组、活血通腑方组和氟伐他汀组。除假手术组外,其余各组采用挫刀摩擦盲肠建立大鼠术后腹腔粘连模型。术后第1天至第7天,假手术组和腹腔粘连组给予生理盐水灌胃,活血通腑方组给予活血通腑方(5.83g/kg)灌胃,氟伐他汀组给予氟伐他汀(10mg/kg)灌胃,每日1次。术后第8天采集样本,观察腹腔内粘连情况并评分,HE染色法和Masson染色法观察粘连局部炎症和胶原纤维沉积情况,Westernblot和real-time PCR法检测盲肠肠管粘连组织中SOCS/JAK2/STAT/PPAR-γ通路相关因子表达情况。结果细胞实验:①活血通腑方对RAW264.7巨噬细胞的细胞活性没有影响,我们选择10%活血通腑方含药血清作为最佳实验浓度;②对比结果表明,活血通腑方对巨噬细胞的影响与IL-4相似,诱导巨噬细胞向M2极化,表达高水平的M2相关细胞因子IL-4、IL-10、IL-13和TGF-β1(p<0.05);③活血通腑方能够逆转LPS+IFN-γ诱导的M1极化趋势,并且降低M1相关细胞因子IL-1、IL-6 和 TNF-α 的表达(p<0.05);④活血通腑方干预巨噬细胞能够降低SOCS3、JAK2、STAT1、p-JAK2、p-STAT1表达(p<0.05),增强 SOCS1、STAT6、PPAR-y、p-STAT6、p-PPAR-γ 表达(p<0.05);⑤RSG促进巨噬细胞向M2极化和PPAR-γ核转位,M2相关细胞因子IL-4、IL-10、IL-13 和 TGF-β 1 表达增强(p<0.05),并且激活 SOCS1、STAT6、PPAR-γ、p-STAT6、p-PPAR-γ信号(p<0.05);⑥T0070907促进巨噬细胞向M1极化,抑制PPAR-γ核转位,M1相关细胞因子IL-1、IL-6 和 TNF-α 的表达增强(p<0.05),并且激活 SOCS3、JAK2、STAT1、p-JAK2、p-STAT1信号(p<0.05);⑦与T0070907组相比,HXTF+T0070907组M1极化趋势明显缓和,M1相关细胞因子表达降低,M2相关细胞因子表达有所升高,并且促进PPAR-γ核转位。动物实验:活血通腑方能够减轻术后腹腔粘连程度,降低粘连评分,改善粘连局部炎症和胶原沉积,抑制粘连组织中SOCS3、JAK2、STAT1、p-JAK2、p-STAT1表达(p<0.05),增强 SOCS1、STAT6、PPAR-γ、p-STAT6、p-PPAR-γ表达(p<0.05)。结论①活血通腑方调控巨噬细胞向M2极化;②活血通腑方调控巨噬细胞极化可能是通过抑制SOCS3/JAK2/STAT1通路,激活SOCS1/STAT6/PPAR-γ 通路实现的;③PPAR-γ不同活化状态对巨噬细胞SOCS/JAK2/STAT/PPAR-γ通路有调节作用,并且会影响巨噬细胞M1/M2极化;④活血通腑方促进PPAR-γ核转位;⑤活血通腑方改善大鼠术后腹腔粘连炎症反应,减轻粘连程度,这种保护作用可能是通过抑制SOCS3/JAK2/STAT1通路,激活SOCS1/STAT6/PPAR-γ通路实现的。