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背景及目的:既往认为内耳缺乏免疫细胞,是一免疫豁免器官,不受全身免疫反应的影响,而近来的研究发现, 内淋巴囊及其周围含有浆细胞和免疫活性细胞,内耳处于免疫系统的监视之下,对内外源性刺激能发生快速反应而引起迷路炎或免疫应答。核转录因子-κBκnuclear transcription factor κB, NF-κB)是一类重要的转录激活因子,在调节炎症反应中起着关键作用,它的过度活化可引起机体的炎性损害。因此我们推测迷路炎的发生可能与局部NF-κB的过度活化有关。本研究旨在通过检测迷路炎时NF-κB的p65亚基及其下游因子TNF-α、IL-2 mRNA的变化,探讨NF-κB与迷路炎的关系,期望为炎性损害引起的内耳功能障碍的防治提供一定的理论依据。方法:1、建立迷路炎动物模型:48只健康豚鼠,随机分为LPSκlipopolysaccharide) 0.01、0.1、1mg/ml实验组和对照组,LPS各实验组分别用0.01、0.1、1mg/ml的LPS注入中耳腔,对照组注入等量生理盐水。在注药后6h、48h、2w三个时间点,每组各取4只,做听性脑干反应κauditory brainstem response,ABR)检测和光镜、电镜形态观察耳蜗病理变化,选择建立模型的合适浓度。2、NF-κB p65和TNF-α、IL-2 mRNA的检测:健康豚鼠42只,随机分为三组:①LPS实验组,1mg/ml的LPS注入中耳腔;②二硫代氨基甲酸吡咯烷κpyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)治疗组,鼓膜注射1mg/ml LPS前,以100mg/kg体重经腹腔注射PDTC;③对照组,双耳注入生理盐水。以6h、48h、2w为观察点,ABR检测后处死动物,分别用免疫组织化学κimmunohistochemistry,IHC)和原位杂交κin-situ hybridization histochemistry,ISHH)技术检测耳蜗NF-κB p65和TNF-α、IL-2 mRNA的表达。结果:1、不同浓度LPS对耳蜗形态和功能的影响:整个观察期内,0.01、0.1mg/ml LPS不能诱发迷路炎和听阈改变;1mg/ml LPS在6h、48h可引起听阈显著升高和迷路炎,2w时基本恢复正常。2、NF-κB p65的表达:NF-κB p65主要表达于正常豚鼠螺旋韧带I型纤维细胞的胞浆。LPSκ1mg/ml)刺激后6h,耳蜗多个部位如螺旋韧带κspiral ligament,SL)Ⅰ~Ⅴ型纤维细胞、根细胞和螺旋神经节细胞κspiral ganglion cell,SGC)等表达增强,<WP=10>以胞核染色为主;48h的表达强于6h κP﹤0.05),而2w与对照组无显著性差异κP>0.05)。3、TNF-α mRNA的表达:正常耳蜗无TNF-α mRNA的表达。LPS刺激后6h,耳蜗SGC、螺旋缘呈阳性染色,血管纹κstria vascularis,StV)、蜗螺旋轴静脉κspiral modiolar vein,SMV)和SL呈弱阳性,以胞核染色为主;48h表达增强,2w后仅SGC呈弱阳性染色。4、IL-2 mRNA的表达:正常耳蜗无IL-2 mRNA的表达,仅在LPS实验组和PDTC治疗组6h时间点,螺旋缘和SGC有表达,而其余各组均未见表达。5、PDTC对模型动物的影响:PDTC治疗组豚鼠6h、48h的听力损失和耳蜗炎症程度以及NF-κB p65和TNF-α mRNA的表达明显轻于相应的LPS实验组,而随着病程的延长,2w时这种差距已不明显κP>0.05)。结论1、中耳腔内不同浓度的LPS对豚鼠内耳及听阈的影响不一,1mg/ml LPS可诱发迷路炎和听力损害。 2、LPS诱发的急性迷路炎可能与耳蜗局部NF-κB p65的活化有关,其机制可能是LPS的刺激引起NF-κB过度活化、进而诱导以TNF-α为代表的多种细胞因子和炎症介质的大量转录,最终导致了炎性损伤和听力损害。3、全身应用NF-κB的活化拮抗剂—PDTC可在一定程度上降低迷路炎时NF-κB p65和TNF-α mRNA在耳蜗的表达,减轻听力损害和迷路炎症。