维生素B₁₂广泛应用于医药和食品工业,主要由微生物发酵得到。本论文从应用角度出发,对维生素B₁₂发酵生产过程中检测、提取方法进行了初步研究,期望为维生素B₁₂发酵工艺改进提供参考借鉴。本论文主要进行了以下几个方面研究: 1.HPLC直接检测发酵液中维生素B₁₂含量 羟基钴胺素、脱氧腺苷钴胺素、甲基钴胺素是发酵产生维生素B₁₂的有效形式。避光条件下,费氏丙酸杆菌菌体经细胞破碎后,使用高效液相色谱分析其中维生素B₁₂各有效成分含量。该检测方法重复性好、分析速度快,可应用于工业发酵生产维生素B₁₂的过程监控和检测,本方法在指导维生素B₁₂产生菌的定向选育方面亦有一定应用价值。 2.维生素B₁₂光稳定性研究及快速检测方法的建立 脱氧腺苷钴胺素和甲基钴胺素对光线十分敏感,光照处理后会完全转化为羟基钴胺素。羟基钴胺素和氰基钴胺素对光线相对稳定。考察了不同光源对脱氧腺苷钴胺素和甲基钴胺素光解转化影响,发现其光解速率与光照强度成正比。 费氏丙酸杆菌细胞破碎液经光照处理,发酵产生的维生素B₁₂各组分迅速转化为单一、稳定的羟基钴胺素。使用HPLC检测光解处理后的细胞破碎液,通过光解转化的羟基钴胺素含量反映维生素B₁₂总含量。此测定方法准确、快速,操作过程不需严格避光,更具工业应用推广性。 3.费氏丙酸杆菌细胞破碎提取维生素B₁₂ 考察超声波法、煮沸法、微波加热法、高压均质法破碎费氏丙酸杆菌动力学过程,比较不同方法提取维生素B₁₂效率。使用煮沸法和微波加热法提取率最高,并且处理过程中可有效去除蛋白质。煮沸法提取维生素B₁₂处理量大,操作简便,适用于工业生产。微波加热法提取维生素B₁₂所需设备简单,处理时间短,可用于HPLC检测过程中样品预处理。 4.大孔树脂吸附法提取纯化发酵液中维生素B₁₂ 费氏丙酸杆菌细胞破碎液经光解处理后,发酵产生的维生素B₁₂完全转化为羟基钴胺素形式。比较了4种大孔吸附树脂对羟基钴胺素的静态吸附、解吸性能,考察了温度和pH对树脂的吸附和解吸性能影响。结果表明CAD45树脂对于羟基钴胺素具有良好的吸附