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骨形成蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP)是一种广泛分布于动物骨组织中的酸性蛋白质,rhBMP作为盖髓剂可促进修复性牙本质的形成,但对其作用机制尚不清楚。研究显示成纤维细胞在rhBMP-7的作用下碱性磷酸酶和骨钙素的合成上调,在体外可形成矿化结节;成纤维细胞、心肌细胞等在rhBMP-7的诱导下在体内可异位成骨。那么,rhBMP-7对牙髓细胞会有什么影响呢?作用机理是什么?将rhBMP-7作为盖髓剂应用于临床保存活髓治疗的前景如何呢?为了初步回答以上问题,我们做了如下体内和体外实验研究。1.原代培养人牙髓细胞至第5代,在培养液中加入不同浓度梯度的rhBMP-7,将被rhBMP-7处理不同天数后的人牙髓细胞进行MTT实验和碱性磷酸酶检测实验。结果显示当rhBMP-7浓度为60μg/L时,既可以显著增强牙髓细胞的增值能力又可有效提高牙髓细胞的碱性磷酸酶活性。2.用浓度为60μg/L的rhBMP-7培养液浸泡处理大鼠新鲜牙髓组织后移植至同种异体大鼠的肾被膜下和头部皮下,于移植不同时间后处死动物,取移植组织切片观察。分别进行HE,和Von Kossa染色观察钙化情况。结果显示被rhBMP-7处理过的大鼠牙髓组织在移植后数天发生不同程度的钙化。钙化呈点块状或多团块聚集状。3.方法同2,切片后进行DSPP,OC和OPN免疫组化染色。结果显示OC,OPN有不同程度的明显表达,DSPP表达不明显。rhBMP-7促使大鼠牙髓组织发生钙化的主导原因是成骨作用,而rhBMP-7诱导牙髓未分化间充质细胞向成牙本质细胞分化的作用微弱。4.制作狗牙的活髓切断术后模型,在壳聚糖温敏凝胶中混入rhBMP-7制成缓释盖髓剂,用本盖髓剂进行盖髓治疗,对照组用氢氧化钙常规盖髓。盖髓若干周后处死动物,取盖髓牙齿常规脱钙切片染色观察。结果显示rhBMP-7制成的生物活性盖髓剂效果较氢氧化钙组更好,形成修复性牙本质和骨样牙本质更快、更多,但是在炎症控制方面未见显著差别。