【摘 要】
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本文以康氏木霉(Trichoderma.koningii)为出发菌(北京微生物研究所收藏编号3.2774),进行了N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(NTG)、He-Ne 激光、紫外线和LiCl 复合诱变,共得到4 株
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本文以康氏木霉(Trichoderma.koningii)为出发菌(北京微生物研究所收藏编号3.2774),进行了N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(NTG)、He-Ne 激光、紫外线和LiCl 复合诱变,共得到4 株纤维素酶高产菌株。NTG 诱变没有得到高产菌株。激光诱变得到8 号和18 号高产突变株,并探索了在不同PH 及缓冲系统下,纤维素酶活的动态变化。在PH4.8,18 号,8 号羧甲基纤维素酶活(CMC 酶活)是出发菌的8.42 倍和2.12 倍;滤纸酶活(FPA)分别是出发菌的2.24倍和1.71 倍。在柠檬酸缓冲系统中,18 号,8 号CMC 酶活是出发菌2.60 倍和1.87 倍, FPA 分别是出发菌的3.89 倍和2.82 倍。在紫外线和LiCl 复合诱变中,得到了CMC 酶活是出发菌的4.50 倍,FPA 酶活是其1.88 倍的突变株E-1。用L16(45)正交实验探索了原生质体的制备,在水解90min,30℃,酶浓度0.25mg/ml,配比为1:1:1 时为原生质体最佳制备条件。经过紫外诱变得到一突变株,CMC 酶活是出发菌株的3.55倍。并对以上菌株进行了传代稳定性考察,结果表明均比较稳定。对4 株突变株产酶活性和稳定性的比较发现18 号突变株产酶活力高。18 号及出发菌产酶培养基的粗酶液,经过SephadexG-75 柱层析初步分离和SDS-PAGE 和等电点电泳检测。
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