Ad-PTEN对胃癌的抑瘤效应和化疗增敏效应及分子机制的研究

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目的:探讨腺病毒介导的PTEN基因体内外对胃癌的抑瘤效应和化疗增敏效应及其分子机制。方法:将携有PTEN基因的复制缺陷型腺病毒载体Ad-PTEN感染QBI-293A细胞,进行病毒扩增,并进一步将病毒纯化及效价测定;RT-PCR鉴定Ad-PTEN基因在QBI-293A细胞和SGC-7901胃癌细胞中的有效表达。体外实验分5组:(1)细胞对照PBS组、(2)空载体Ad-GFP组、(3)Ad-PTEN组(实验组)、(4)顺铂DDP组(阳性对照组)、(5)Ad-PTEN+DDP组(联合组)。光学显微镜及荧光显微镜下观察Ad-PTEN感染QBI-293A细胞和SGC-7901胃癌细胞前后形态的变化;MTT法检测Ad-PTEN对SGC-7901胃癌细胞的生长的抑制作用;用流式细胞术(FCM)检测Ad-PTEN对SGC-7901胃癌细胞凋亡的作用。RT-PCR分析bax、bcl-2、p53、Survivin细胞凋亡相关基因的表达。体内试验:分组同体外实验,采用SGC-7901胃癌细胞株建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,均采用瘤体局部多点注射干预用药,动态测量肿瘤体积,并计算瘤重抑瘤率,瘤体HE染色法观察细胞形态,免疫组化检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax、Survivin、Fas、Caspase-3、Cox-2和肿瘤血管形成相关因子CD34、VEGF等基因的表达。结果:Ad-PTEN基因可在QBI-293A细胞中增殖,病毒效价检测为(1-2)×10~9 pfu/ml。Ad-PTEN基因感染SGC-7901胃癌细胞后,RT-PCR结果显示PTEN目的基因能在SGC-7901胃癌细胞中转录,Ad-PTEN体外能明显抑制人SGC-7901胃癌细胞的生长和诱导凋亡,体内同样能明显抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长,与PBS组、Ad-GFP组相比具有明显的抑制作用(P<0.05);Ad-PTEN能明显上调Fas、bax、Caspase-3和下调bcl-2、Cox-2、Survivin等凋亡相关蛋白的表达;能明显下调肿瘤血管形成因子CD34、VEGF的表达,与PBS组、Ad-GFP组相比具有显著差异,P<0.05,具有统计学意义。Ad-PTEN+DDP联合组体内外抑制SGC-7901胃癌细胞及裸鼠移植瘤的生长和诱导凋亡的作用,分别与Ad-PTEN组和DDP相比,P<0.05,具有统计学意义,说明PTEN具有化疗增敏效应。结论:1.本实验成功将腺病毒介导的PTEN单基因载体Ad-PTEN经多轮扩增、纯化后可获得高纯度、高滴度的重组腺病毒,重组腺病毒Ad-PTEN基因可在QBI-293A细胞和SGC-7901胃癌细胞中转录和表达。2. Ad-PTEN体外实验可抑制SGC-7901胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡,体内可抑制裸鼠胃癌移植瘤的生长,具有抑瘤效应。3. Ad-PTEN联合DDP体内外可抑制SGC-7901胃癌细胞和裸鼠胃癌移植瘤的生长、诱导凋亡,具有化疗增敏效应。4. Ad-PTEN抗胃癌机制可能与上调细胞周期阻滞和细胞凋亡相关因子Fas、bax Caspase-3的表达和下调bcl-2、Cox-2和Survivin的表达,并下调肿瘤血管形成相关因子VEGF和CD34的表达有关;增加DDP的化疗敏感性可能与上调因子Fas、Caspase-3的表达和bax/bcl-2比及其下调Survivin、VEGF、Cox-2和CD34的表有关。为研究Ad-PTEN抑瘤作用和化疗增敏效应的分子机制提供了实验依据。
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