三氧化二砷对急性髓系白血病细胞凋亡及survivin表达的影响研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yaki84
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目的:应用白血病细胞体外培养的方法,观察三氧化二砷(As2O3)对急性髓系白血病(AML)原代细胞增殖、凋亡及对survivin基因表达的影响,探讨As2O3抗肿瘤可能的作用机制,为临床提供理论依据。   方法:   1、骨髓单个核细胞(MNC)分离及培养:无菌条件下采集AML骨髓液2mL(肝素抗凝),用Ficoll淋巴细胞分离液提取单个核细胞,培养于含10%胎牛血清(FBS)、100IU/mL青霉素、100IU/mL链霉素的RPMI1640培养液中,置于37℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中培养。   2、分为五个组,不加药对照组、1μmol/LAs2O3组、2μmol/LAs2O3组、5μmol/LAs2O3组、10μmol/LAs2O3组,作用时间分为6、12、24、48小时,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度不同时间点作用后细胞的活力,观测细胞增殖是否受到抑制。   3、用流式细胞仪对5μmol/LAs2O3组、10μmol/LAs2O3组作用24小时的细胞进行凋亡检测,以明确As2O3对AML原代细胞凋亡的影响。   4、用实时荧光定量PCR(Real Time PCR)方法检测AML抑凋亡基因survivin表达情况,以及10μmol/LAs2O3作用24小时后AML原代细胞survivin基因的表达水平。   结果:   1、MTT结果显示:6、12、24、48小时时间点,与对照组比较,As2O3均能抑制AML原代细胞的增殖,呈浓度依赖关系,其中以10μmol/LAs2O3对细胞增殖抑制作用最强。随作用时间延长,抑制率也逐渐增加,其抑制作用亦呈时间依赖关系。   2、流式细胞凋亡分析结果显示:作用24小时后,5μmol/LAs2O3组细胞凋亡率为24.22±12.78%,与对照组(15.42±12.03%)相比无明显差异,10μmol/LAs2O3组凋亡率为34.82土17.73%,与对照组相比差异显著。   3、Real Time PCR检测结果显示:AML抑凋亡基因survivin阳性表达率为52.94%,阳性表达者进一步检测As2O3对survivin表达的影响,10μmol/LAs2O3作用24小时能下调survivin基因的表达,处理前后差异显著。   结论:   1、As2O3能抑制AML原代细胞增殖,在一定范围内呈浓度-时间依赖关系。   2、AML原代细胞表达抑凋亡基因survivin。   3、As2O3促进凋亡,可能与下调survivin基因表达有关。
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