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背景：抗青光眼滤过性手术是治疗青光眼的重要方法，但手术失败率高达15%-30%，其主要原因是滤过泡瘢痕形成。虽然临床上应用5-氟脲嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、丝裂霉素C (mitomycin C, MMC)提高了滤过术的成功率，但仍然存在某些严重的并发症，如滤过泡渗漏、术后浅前房以及角膜毒性等。因此，寻求一种更为有效、安全的抗瘢痕药物仍是研究的重点。各种研究表明转化生长因子-β (Transforming growth factior-β,TGF-β)与组织瘢痕形成的关系最为密切。TGF-β有5个亚型，哺乳动物只表达3个亚型，即TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3，其中TGF-β2被认为是与眼部瘢痕形成最密切的亚型。TGF-βII型受体(Transforming growth factior-β receptor II, TβRII)是TGF-β信号传递的始动受体，TGF-β首先与TβRII结合激活募集到TGF-β I型受体(Transforminggrowth factior-β receptor I, TβRI)，并磷酸化TβRI，启动胞内信号转导。TβRII磷酸化TβRI的GS区，使TβRI磷酸化是信号传递的关键步骤。因此，以TβRII作为封阻靶点，干扰TβRII与TGF-β结合，阻断TGF-β信号转导，以达到抗纤维化的作用，这将对抗纤维化研究提供新的途径。本课题组前期已经成功建立SELEX (SystematicEvolution of Ligands by Exponential Enrichment)筛选平台，并从ssDNA随机序列库中筛选得到靶向TβRII胞外段蛋白的核酸适配子。然而适配子对TGF-β与其受体结合是否具有阻抑效应，需实验进一步验证，从而筛选得到具有干扰效应的适配子，为抗瘢痕治疗的研究提供实验依据。目的：本研究拟在体外实验验证靶向TβRII的核酸适配子对TGF-β2生物学效应的干扰作用，并初步探讨适配子干扰效应的机制，进一步筛选得到具有封阻TGF-β2生物学作用的适配子。方法：1.取人眼Tenon囊组织贴壁法体外培养成纤维细胞(Human Tenon fibroblasts,HTFs)，第5代~第10代细胞应用于实验。2.不同浓度TGF-β2(1、2、5、10、20ng/ml)诱导HTFs24h，以及TGF-β2(2、5ng/ml)诱导HTFs不同时间(6、24、48、72h)，应用Western blot检测细胞α-SMA、pSmad2蛋白表达；共聚焦细胞免疫荧光技术检测α-SMA及F-actin定位表达。3.凝胶收缩实验检测不同浓度TGF-β2(1、2、5、10ng/ml)作用下细胞收缩力的变化，以及适配子S58/68与TGF-β2(2ng/ml)共同作用下细胞收缩力的改变。4.核酸适配子S58/68分别与TGF-β2共同作用HTFs24h，应用Western blot检测细胞α-SMA、pSmad2蛋白表达，共聚焦细胞免疫荧光技术检测α-SMA及F-actin定位表达。结果：1. TGF-β2(1、2、5、10、20ng/ml)诱导HTFs24h后，α-SMA表达较对照组明显增加(P <0.05)，10ng/ml、20ng/ml浓度组较2ng/ml、5ng/ml浓度组蛋白表达下降；浓度为2ng/ml TGF-β2组α-SMA表达在24-48h达到高峰。TGF-β2促进细胞骨架蛋白F-actin表达，并能显著提高HTFs的收缩力。2.适配子S58具有明显阻抑TGF-β2诱导HTFs表达α-SMA、细胞骨架蛋白F-actin，并显著抑制TGF-β2介导HTFs的细胞收缩。不同浓度适配子组(20nM、100nM)作用之间无明显差异。3. TGF-β2(2ng/ml)诱导HTFs表达磷酸化Smad2，作用在30min~1h达高峰，2h开始出现pSmad2表达下降；适配子S58具有明显阻抑TGF-β2诱导HTFs Smad2磷酸化水平以及pSmad2向细胞核内转位。4.适配子S68对TGF-β2诱导HTFs的表型转化无明显的干扰作用。结论：1.在体外实验中，TGF-β2可诱导HTFs明显表达α-SMA，具有一定的浓度依赖性；并且2-5ng/ml TGF-β2浓度组对HTFs诱导α-SMA表达作用达到一个峰值；表明TGF-β2可诱导HTFs向肌成纤维细胞转分化。2.在体外实验中，靶向TGF-β II型受体的核酸适配子S58能明显阻抑TGF-β2诱导HTFs向肌成纤维细胞转分化。3. Smad通路参与了TGF-β2诱导HTFs转分化的过程；核酸适配子S58明显阻抑TGF-β2介导HTFs表达pSmad2，以及pSmad2向细胞核内转位，因此推测适配子S58能够干扰TGF-β2与其受体结合，封阻受体激活而活化的下游信号通路，从而减弱TGF-β2介导的生物学效应；可能为青光眼滤过术后抗瘢痕治疗提供新的思路。4.适配子S58与S68对TGF-β2在体外细胞干扰作用不同，可能与适配子的结构不同相关。