论文部分内容阅读
目的：研究经体外诱导培养不同激活状态巨噬细胞的表型特征以及其对Hep G2肝癌细胞生长和侵袭的影响。为巨噬细胞应用于肝癌的临床免疫治疗提供理论依据。方法：从健康成人外周血中分离出单核细胞，采用GM-CSF培养分化成巨噬细胞，再分别用LPS和IFN-γ诱导培养出经典激活巨噬细胞（M1或TAM1），IL-4诱导培养出选择激活巨噬细胞（M2或TAM2）。流式细胞术检测这三种不同激活状态巨噬细胞CD68和CD206的表达；ELISA法检测不同激活状态巨噬细胞IL-10和IL-12的分泌水平；RT-PCR检测不同激活状态巨噬细胞TNF-α，CCL3， iNOS，Arg-1，AMAC-1等mRNA的相对表达量；MTT法检测不同激活状态巨噬细胞培养上清液对Hep G2肝癌细胞的生长抑制率；Transwell侵袭试验检测不同激活状态巨噬细胞对Hep G2肝癌细胞侵袭的影响。结果：1.不同激活状态巨噬细胞的表型特征1)诱导培养出的UaM，TAM1和TAM2均较高表达CD68，表达率分别为42.52±4.52%，61.53±5.29%和66.28±6.87%，CD206的表达率分别为3.61±0.84%、0.86±0.46%和32.16±3.61%，TAM2CD206的表达率明显高于UaM和TAM1（P＜0.05）。2) UaM和TAM1细胞IL-10的分泌量不存在统计学差异（P＞0.05），且二者IL-10的分泌量均低于TAM2细胞（P＜0.05）；IL-12的分泌量在UaM、TAM1和TAM2三种细胞中均存在差异（P＜0.05），TAM1细胞IL-12的分泌量最多，UaM细胞IL-12的分泌量最少。3) TAM1对于TNF-α、CCL3、和iNOS mRNA的表达量显著高于TAM2，而AMAC-1、Arg-1mRNA的表达量TAM1则低于TAM2（P＜0.05）；2.不同激活状态巨噬细胞对肝癌细胞生长和侵袭的影响1) TAM1培养上清液对Hep G2肝癌细胞的生长抑制率均明显高于UaM组和TAM2组（P<0.05）。随着TAM1培养上清液浓度的增高，其对Hep G2肝癌细胞的生长抑制率逐渐升高；然而TAM2对Hep G2肝癌细胞的生长抑制率则随着其培养上清液浓度的增高而降低。2)各组间穿过transwell基底膜的细胞数量均存在差异（P<0.05），TAM1+Hep G2组穿过transwell基底膜的细胞数量最少，TAM2+Hep G2组穿过transwell基底膜的细胞数量最多。结论：1.在体外诱导产生的TM1和TAM2细胞为两类具有不同表型特征的巨噬细胞细胞亚群。2. TAM1在体外能有效地抑制Hep G2肝癌细胞的增殖和侵袭，起到抗肿瘤作用；TAM2在体外则促进Hep G2肝癌细胞的增殖和侵袭，促进肿瘤的进展。