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肿瘤干细胞(CSCs)与肿瘤的抵抗治疗、复发和转移密切相关,靶向CSCs有望为肿瘤治疗提供新的治疗策略。本研究通过检测肺癌、胰腺癌中CSCs标志物的表达确定肺癌、胰腺癌细胞系中的CSCs,进而筛选确定4株候选CSCs单克隆抗体(mAb)识别肺癌、胰腺癌CSCs的情况和对其自我更新功能的影响。利用流式细胞术检测多株肺癌细胞系,发现肺腺癌细胞系A549可能含有较丰富的CD133’ CSCs。采用无血清sphere培养技术、免疫荧光共染技术、流式细胞术和球体干细胞PKH26染料标记的方法,不仅证明A549细胞sphere培养富集了肺癌细胞系中的CSCs,还发现A549细胞CSCs具有表达干细胞标志物CD133和OCT4的特征。随后采用流式细胞术和免疫荧光定位检测技术分析了各候选CSCs mAb对肺癌细胞系A549及其sphere细胞中的干细胞的识别情况,结果显示mAb 3G7、11C9、15D2和15H7均可识别肺癌细胞系A549中CD133+和OCT4+的CSCs.用这四株候选CSCs mAb对A549及其sphere细胞的自我更新和生长进行体外抑制试验,结果显示mAb 3G7、11C9、15D2和15H7对A549的sphere球体形成均有显著抑制作用,成球抑制率分别为19%,40.4%,67.2%和37.9%,其中mAb 11C9、15D2和15H7还可以抑制A549 sphere细胞和亲本细胞的生长。在胰腺癌中发现,胰腺癌细胞系PANC1具有较丰富的ESA+CD44+CD24+的胰腺癌CSCs,并以表达CD24为其主要特征。流式细胞术和免疫荧光定位检测发现mAb 11C9、15D2和15H7可识别胰腺癌细胞系PANC1中CD24+CSCs,并且也可以识别患者胰腺癌组织移植瘤中的ESA+CD24+CSCs, sphere培养可富集这些mAb识别的细胞。与肺癌的结果类似,mAb 11C9、15D2和15H7对PANC1细胞的sphere球体形成有显著抑制作用,成球抑制率分别为15.5%、66.0%、54.0%；对PANC1 sphere细胞生长有显著抑制作用,抑制率分别为26.6%、26.6%、24.7%。以上结果提示,mAb 11C9、15D2和15H7可靶向肺癌、胰腺癌中的CSCs,并抑制CSCs的自我更新和肿瘤细胞生长,具有靶向CSCs治疗肺癌、胰腺癌的潜力。同时,这些结果也为通过mAb 11C9、15D2和15H7反向发现鉴定肺癌、胰腺癌CSCs膜表面的治疗靶标分子提供了依据。