紫外线减毒柔嫩艾美耳球虫YL株虫苗的制备及预防效果研究

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鸡球虫病是一种呈全球性分布的原虫病,其发病率可高达50%~70%,死亡率为20%~30%,严重者高达80%,每年全世界因球虫病造成的经济损失超过30亿美元。虽然使用抗球虫药这种传统方法在球虫防治中发挥了积极的作用,但是球虫耐药株的不断出现、公众对药物残留的恐惧以及新药研究的缺乏,使得活疫苗接种在不久的将来会成为控制球虫病的主要措施。因此,我们开展了本项研究,并取得如下结果:(1)对E. tenella YL株进行以紫外线照射为主的6种方法进行致弱,然后将这6种方法致弱的和未照射的E. tenella YL株孢子化卵囊,分别经口接种8日龄无球虫感染的健康尼克红小公雏,剂量为1×10~5个/羽,对肠道病变记分、每克粪便卵囊数(OPG)、平均增重、死亡率、血便排放情况等几项指标进行测定,研究其致病性。结果显示:未照射的球虫卵囊对鸡体的影响较大,症状和病理变化严重,且有死亡现象,死亡率在5%以上。而照射后的球虫卵囊对鸡体的影响显著减轻,试验组鸡未出现死亡现象,但镜检时查出大量卵囊,其中方法5致弱的卵囊对鸡的致病性最弱,其相对增重率和盲肠病变记分等都较其他照射方法有明显减轻。(2)用6个不同方法照射致弱的E. tenella YL株虫苗免疫雏鸡,筛选免疫保护效果最好的致弱方法。结果显示:用方法5致弱的鸡E. tenella YL株的孢子化卵囊免疫鸡,鸡的日平均体重曲线呈稳定上升趋势,产生的卵囊总量少于其它试验组和阳性对照组,OPG值曲线也较其它组低且稳定,且该组鸡的组织病理变化也较其它试验组和阳性对照组轻。(3)用最佳致弱方法制得的紫外线致弱虫苗免疫雏鸡,筛选免疫保护效果最好的免疫剂量。结果显示:免疫剂量为8 000个/羽时,相对增重率较其它组高,而OPG值、组织病理学变化比其它组轻。(4)用最佳致弱方法制得的紫外线致弱虫苗免疫雏鸡,筛选免疫保护效果最好的免疫日龄。结果显示:9日龄首免时,相对增重率和成活率较其它组高,而OPG值和盲肠病变记分较其它组轻。(5)用最佳致弱方法制得的紫外线致弱虫苗免疫雏鸡,利用非特异性酯酶(ANAE)染色法,显示该虫苗免疫后鸡体内淋巴器官T细胞的数量变化,为鸡球虫疫苗的免疫机制提供组织学基础。结果显示:免疫组的胸腺、脾、盲肠扁桃体等器官的T细胞数量均高于对照组,但各器官T细胞数量增加高峰期和峰值是有差别的。其中胸腺的高峰期最早,出现在2免后第7天,峰值为118个/100μm~2;其次为盲肠扁桃体,出现在2免后第10天,峰值为64个/100μm~2;脾脏的高峰期出现最晚,在2免后第14天,峰值为83个/100μm~2。
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