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研究背景三氯乙烯（Trichloroethylene，TCE）作为高分子化合物的常用原料被广泛应用于玩具、五金、电子等行业，主要用于线路板清洗、金属器械表面去污、油脂和石蜡萃取等。职业接触工人长时间低浓度接触TCE可导致职业性三氯乙烯药疹样皮炎（Occupational Dermatitis Medicamentosa-like of Trichloroethylene,ODMLT），临床资料显示严重的肝损伤是ODMLT患者的主要致死原因之一，但是这种伴随的免疫性肝损伤用以往的迟发型变态反应并不能完全解释。现有报道发现，补体激活及其激活产物在ODMLT患者肝损伤过程中发挥重要作用，本课题组前期研究发现，在TCE致敏豚鼠和BALB/c小鼠中，存在大量的C3a、C5a和C5b-9的沉积，证实了补体激活及其激活产物在TCE致敏动物过程中确实发挥了重要作用，本研究拟在课题组前期研究的基础上，进一步探讨补体激活产物在TCE致敏动物过程中的具体机制。研究目的本研究通过建立TCE致敏BALB/c小鼠模型，采用腹腔注射C3aR受体阻断剂，特异性阻断C3a和C3aR的结合，研究TCE致免疫性肝损伤小鼠模型中C3a及其受体对Th1/Th2细胞平衡的影响。研究方法选取6～8w SPF级健康雌性BALB/c小鼠，经适应性喂养1w后，随机分成空白对照组、溶剂对照组、TCE处理组和C3aRA预处理组，根据豚鼠最大值试验和本课题组已发表的文章，建立TCE致敏BALB/c小鼠实验模型，根据皮肤致敏情况将TCE处理组分为TCE致敏组和TCE未致敏组，C3aRA预处理组分为C3aRA预处理TCE致敏组（阻断致敏组）和C3aRA预处理TCE未致敏组（阻断未致敏组）；采用HE染色观察不同组别小鼠肝脏病理改变，生化检测ALT和AST反映小鼠肝脏功能变化，采用免疫荧光双标的方法检测C3aRA在本致敏模型中的作用，采用免疫组化的方法检测各组中C3a和C3aR的表达情况，采用直接免疫荧光法检测补体激活末端产物C5b-9的表达，分别采用流式细胞术和酶联免疫吸附试验测定小鼠脾脏和血清中IFN-γ和IL-4的表达水平，利用SPSS软件包，对实验数据进行综合分析。结果1.小鼠致敏率65只TCE处理组实验小鼠共有24只发生明显的水肿和红斑，致敏率为36.9%；C3aRA预处理组共有62只实验动物，其中32只发生明显皮肤反应，判为阻断致敏组，致敏率为51.6%，本实验小鼠总体致敏率为44.1%。2.肝脏病理学检查结果HE结果显示，TCE致敏组中出现大量的肝细胞变性、坏死和炎细胞浸润，且相应时点阻断致敏组的这种情况表现更为明显和严重；空白对照组、溶剂对照组、TCE未致敏组和阻断未致敏组肝细胞形态正常，未见明显改变。3.小鼠肝功能检测结果对小鼠肝功能主要指标ALT和AST进行生化检测，结果显示：溶剂对照组和空白对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05）；TCE致敏24h组、TCE致敏48h组、TCE致敏72h组ALT和AST的表达均高于相应未致敏组，差异有统计学意义（P<0.05）；阻断致敏组中ALT的表达水平与相应时点TCE致敏组相比无明显差异，差异无统计学意义（P>0.05）；但是，阻断致敏48h组和阻断致敏72h组中AST的表达水平与相应时点TCE致敏组相比显著升高，差异有统计学意义（P<0.05）。4.肝脏组织中C3a与其受体C3aR结合及阻断检测免疫荧光双标法结果显示，TCE致敏组中C3a与其受体C3aR发生特异性结合，但是这种特异性结合在阻断致敏组中被有效阻断，提示SB290157在本动物模型中确实是一种特异性的阻断剂，为后续研究提供基础。5.肝脏组织中C3a与其受体C3aR的表达情况溶剂对照组与空白对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05）；与溶剂对照组相比，TCE致敏组中C3a和C3aR的表达明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；TCE致敏组中C3a和C3aR的表达均高于相应TCE未致敏组，差异有统计学意义（P<0.05）；阻断致敏组中C3a的表达与其在TCE致敏组中的表达一致，但是阻断致敏24h组、阻断致敏48h组、阻断致敏72h组与相应时点TCE致敏组相比，C3aR的表达明显减少，差异有统计学意义（P<0.05）。6.肝脏组织中C5b-9的沉积情况应用免疫荧光技术检测小鼠肝脏组织中C5b-9的沉积情况，结果显示：在TCE致敏组和阻断致敏组中均有大量沉积，且均在72h沉积量最多，在两组间的沉积未见明显差异，差异无统计学意义（P>0.05）。7.脾脏组织中IFN-γ和IL-4的表达情况溶剂对照组与空白对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05）；IFN-γ在TCE致敏组和阻断致敏组中的表达基本一致，两组间未见明显改变，差异无统计学意义（P>0.05），TCE致敏组和阻断致敏组均高于溶剂对照组，差异有统计学意义（P<0.05），不同时点TCE致敏组和阻断致敏组均高于相应未致敏组，差异有统计学意义（P<0.05）；TCE致敏组中IL-4的表达水平明显高于溶剂对照组，差异有统计学意义（P<0.05），不同时点TCE致敏组中IL-4的表达明显高于相应的TCE未致敏组，但是，阻断致敏组中IL-4的表达明显下调，阻断致敏24h组、阻断致敏48h组、阻断致敏72h组显著低于相应的TCE致敏组，差异有统计学意义（P<0.05）。8.血清中IFN-γ和IL-4的表达情况溶剂对照组与空白对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05）；TCE致敏组中IFN-γ和IL-4的表达水平均高于溶剂对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；不同时点TCE致敏组中IFN-γ和IL-4的表达水平均高于相应的未致敏组，差异有统计学意义（P<0.05）；阻断致敏组中IFN-γ的表达情况与TCE致敏组基本一致，两组之间未见明显差异，差异无统计学意义（P>0.05）；阻断致敏组中IL-4的表达水平明显低于溶剂对照组，阻断致敏48h组和阻断致敏72h组中IL-4的表达水平明显低于相应的TCE致敏组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论1.在一定剂量下，TCE可以致敏小鼠，本次实验致敏率为44.1%。2.补体激活产物C3a及其受体C3aR在TCE致敏小鼠过程中调节Th1/Th2平衡，对TCE所致免疫性肝损伤发挥重要作用。