谷氨酰胺转胺酶(谷氨酰胺-γ-谷氨酰氨酰基转移酶,protein-glutamine-γ-glutamyltransferase,E.C.2.3.2.13,TG)是一种催化酰基发生转移的酶,可通过催化蛋白质或多肽中谷氨酰胺基的转移反应,使蛋白质或多肽分子间或分子内形成共价交联,直接改变蛋白质本身或蛋白质所附着的细胞、组织等的特性,从而改变其结构和理化性质,甚至带来新的功能。在食品、医药以及化妆品等领域有广泛的应用前景。 本研究首先对茂原链霉菌(Streptoverticillium mobaraense)孢子细胞壁进行纳米级观察及细胞壁氨基酸成分分析,优化了原生质体的制备条件。通过传统育种紫外线,NTG,60Co-γ射线对原生质体进行复合诱变,获得1株遗传较为稳定谷氨酰胺酶酶活力达到0.1U/ml以上的突变株。构建基因组体外片段化诱变转化原生质体的方法,即将基因组超声波片段化之后用亚硝酸钠进行诱变,PEG-CaCl2介导诱导转化紫外灭活原生质体(15W,10cm,15min),进行基因组改组育种。由此获得2株性谷氨酰胺转胺酶酶活提高到0.2U/ml以上的突变株,诱变突变株较原始出发菌株产中性蛋白酶活力提高100％以上,初步证明了该方法技术在茂原链霉菌育种上的可行性。 由于MTG酶活力测定成本太高,难以进行高通量筛选,无法获得高产量的MTG生产菌株一直是其工业生产上的瓶颈。本文建立了一套以酪蛋白胶联絮凝性原理为基础,检测450nm下吸光值为指标的新型低成本、高通量初筛方法。应用于上述各种育种方法的初筛,筛选到了产量较高的菌株。并通过于单氧肟酸法筛选结果相比较,证明该方法是一种行之有效的新方法。