论文部分内容阅读
目的本研究通过在短时期内给予大量酒精灌胃的方法建立急性酒精性肝损伤的动物模型,并同时给予腹腔内注射NF-κB阻断剂PDTC,探讨在PDTC干预下大鼠急性酒精性肝损伤中NF-κB及COX-2的作用机制以及对TNF-α表达的影响。方法1、干预组每天禁食不禁水12小时后给予浓度为55%酒精,8g/kg.d,一天分2次灌胃,于酒精灌胃第三天起,于酒精灌胃前30分钟给予PDTC腹腔注射50mg/kg.d,共1周,模型组于酒精灌胃第三天起,给予相同容积生理盐水腹腔注射,余操作同干预组。对照组通过给予相同容积的生理盐水灌胃及腹腔内注射。实验第1周和第2周末行灌胃后于12小时后分别处死,并左心室采血分离血清待测生化指标,采血后立即取肝组织用福尔马林固定,做病理、免疫组织化学检测。2、利用全自动生化分析仪检测血清ALT和AST值,肝脏组织常规做石蜡包埋,并且切片行HE染色和免疫组化染色(SABC法),并且密切观察肝脏组织病理变化和NF-kB、TNF-α以及COX-2的表达和分布。结果1.大鼠血清中ALT、AST值的比较：于实验第1周和第2周,模型组与对照组以及干预组与模型组比较血清中ALT和AST值均明显有变化；具有统计学意义(P<0.01)；在模型组第1周与第2周比较中可看出血清ALT和AST值均明显升高,AST/ALT比值>2；具有统计学意义(P<0.01)。2.病理学检查：HE染色结果：实验第1周和第2周,模型组与对照组相比较而言,肝脏细胞肿胀明显,可见到大小不等的脂肪空泡,有些部分还可见到灶壮坏死,炎症细胞浸润,随造模时间延长模型组病变加重。PDTC干预组较模型组肝细胞脂肪变性以及炎症细胞浸润较轻。3.免疫组化染色结果(1) NF-κB、COX-2、TNF-α阳性细胞都主要分布在肝中央静脉周围。实验第1周和第2周,模型组中NF-κB、COX-2、TNF-α的表达强度明显高于对照组；均具有统计学意义(P<0.01)；干预组与模型组比较而言表达有明显降低；均具有统计学意义(P<0.05)。模型组第2周较第1周表达增高；均有统计学意义(P<0.05)。(2)肝组织中COX-2的表达与NF-κB表达呈正相关(Spearman等级相关r=0.435,P<0.05)。(3)肝组织中NF-κB的表达与TNF-α表达呈正相关(Spearman等级相关r=0.336,P<0.05)。(4)肝组织中COX-2的表达与TNF-α表达呈正相关(Spearman等级相关r=0.702,P<0.01)。结论1、PDTC抑带NF-κB的活化,进而下调COX-2及TNF-a的表达；2、NF-κB、COX-2参与了大鼠急性酒精性肝损伤的发生发展,并且COX-2的表达可能由NF-κB介导；3、NF-κB、COX-2可通过激活大鼠中TNF-α在其急性酒精性肝损伤过程中发挥作用；