橄榄果实潜伏性病原菌的分离鉴定、生物学特性和生物防治研究

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橄榄[Canarium album(Lour.)Raeusch]是中国南方亚热带的名特优水果,其果实营养丰富,具有良好的保健作用和较高的药用价值。近年来橄榄果实采后病害的种类及危害程度日益增多,严重影响采后橄榄果实的商品率、贮藏品质及其货架期。病原菌的潜伏侵染是采后橄榄果实病害发生的主要因素,是进行橄榄贮藏保鲜前急需解决的问题之一。目前,有关橄榄潜伏性病原菌种类的分离鉴定及其生物学特性分析的研究较少。本研究以福建省闽侯县主摘橄榄品种‘长营’作为试验材料,在其生长的几个关键时期(盛花期、幼果期、膨大期、成熟前期和成熟期)采用组织分离法从果实(或花器)中分离得到潜伏性病原菌,结合形态学、分子生物学和系统发育学对其进行鉴定,对分离频率较高的两种主要潜伏性病原菌进行生物学特性研究,并对其中一种潜伏性病原菌的生物防治进行初步研究。主要研究结果如下:1、橄榄果实潜伏性病原菌的分离鉴定:通过组织分离法从‘长营’橄榄花器和果实中分离获得多种病原菌,有葡萄座腔菌科(Neofusicoccum parvum=Botryosphaeriaceae)、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)、拟茎点霉属(Phomopsis)、革菌属(Phanerochaete)、球座菌属(Guignardia)和表丝联球霉属(Fumago Pers.ex Sacc)共六个属(科)的真菌。其中葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)和小孢拟盘多毛孢(Pestalotiopsismicrospora)为橄榄果实的主要潜伏性病原菌,且这两种病原菌的主要潜入时期均为盛花期。通过对橄榄果实不同生长阶段叶片病原菌的分离鉴定,发现各生长阶段叶片上的主要病原菌与果实的主要潜伏性病原菌种类一致,结果表明橄榄果实和叶片之间的病原菌存在交叉侵染的现象。2、橄榄葡萄座腔菌的生物学特性:橄榄葡萄座腔菌菌落生长最适pH为6,最适温度为28℃,最适光照条件为全光照和光暗交替;该菌产生子座的最适pH为7,最适温度为26~28℃,全光照条件更有利于其产生子座;分生孢子萌发最适pH为7,最适温度为28℃,光照条件对孢子的萌发无显著影响。该病原菌在以葡萄糖、蔗糖为碳源和以蛋白胨为氮源的培养基上菌落生长速度较快,在以蔗糖、麦芽糖为碳源和以蛋白胨为氮源的培养基上产子座数较多;分生孢子的萌发对空气相对湿度(RH)的要求较高,在空气相对湿度100%条件下孢子萌发率最高[(79.9±1.52)%],且随着RH的降低分生孢子萌发率也随之降低,当湿度低于80%时分生孢子不能萌发;菌丝及分生孢子的致死温度分别为56℃(30 min)、60℃(30min)。3、橄榄小孢拟盘多毛孢的生物学特性:橄榄小孢拟盘多毛孢菌落生长最适温度为24~26℃,最适pH为6,最适光照条件为全光照处理;该病原菌产孢最适pH为7,最适温度为24~26℃,光暗交替条件下产孢量最多;分生孢子萌发最适pH为6,最适温度为26~28℃,全黑暗条件下孢子萌发率更高。该病原菌在以D-果糖、甘露醇为碳源和以蛋白胨为氮源的培养基上菌落生长速度较快且菌落生长绒密,在以葡萄糖、蔗糖为碳源和以蛋白胨为氮源的培养基上产孢量最大。该病原菌分生孢子的萌发对空气相对湿度(RH)的要求较高,在空气相对湿度100%时分生孢子萌发率最高[(52.81±2.66)%],且随着RH的降低分生孢子萌发率也随之降低,当湿度低于85%时分生孢子不能萌发;菌丝及分生孢子的致死温度分别为 54℃(30 min)、56℃(20 min)。4、橄榄小孢拟盘多毛孢的生物防治:通过结合离体筛选法和活体筛选法,确定拮抗菌LY-1、TNX-1和MG-3中拮抗菌LY-1发酵上清液具有较好的拮抗效果。进一步研究了浓度、温度及pH对拮抗菌LY-1发酵上清液抑制橄榄小孢拟盘多毛孢菌落生长的影响,结果表明浓度对拮抗菌LY-1发酵上清液抗菌活性的影响较大,随着拮抗菌LY-1发酵上清液浓度的升高(稀释倍数降低)抑制效果也随之增强;温度对拮抗菌LY-1发酵上清液的拮抗物质的活性无显著影响,在处理温度从40℃上升到120℃过程中,拮抗菌LY-1发酵上清液对橄榄小孢拟盘多毛孢菌落生长的抑制率仅下降10%左右,因此说明拮抗菌LY-1发酵上清液含有的抗菌活性物质是一种具有热稳定性的物质。当拮抗菌LY-1发酵上清液的pH>6时,拮抗效果较好且具有良好的持续抑制作用,而当pH<6时拮抗效果较差。因此,研究结果表明碱性条件有利于保持拮抗菌LY-1发酵上清液的拮抗活性。
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