番茄SlEIL对乙烯合成的转录调控

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以模式植物番茄(Solanum lycopersicum Mill.)为试材,研究了果实成熟衰老相关变化,采用基因表达、基因互作等技术,结合转基因材料,探索了乙烯信号转导途径转录因子SlEIL反馈调控SlACS与SlACO,进而调节乙烯合成的机制,主要结果如下:1、研究了SlACS和SlACO基因的组织特异性。SlACS基因的组织特异性表达显示,SlACS2和SlACS4主要在番茄果肉中表达,SlACS1、SlACS3和SlACS8在花中的表达量较高,SlACS5在茎中表达最强但在果肉组织中的表达低于检测限(果实成熟进程研究不做为研究对象),而SlACS6与SlACS7在不同组织中的表达量相差不大。SlACO基因在不同组织中广泛表达,SlACO1在果实中的表达量明显高于其他组织,SlACO2、SlACO3和SlACO4均在花中表达最强,SlACO5则在叶片中表达最高,而SlACO6除在茎中表达量较低以外,其余三种组织相差不大。2、开展了SlEIL、SlACS和SlACO基因在番茄果实不同成熟阶段的表达模式研究。对4个不同成熟期果实,即绿熟(MG),破白(BR),粉红(PK),红熟(RR)的研究表明,伴随着成熟,果实色泽指数和乙烯释放量增加、硬度下降。SlACS基因家族各成员表达模式不尽相同,其中SlACS2和SlACS4表达随果实成熟显著上升,SlACS1、SlACS3、SlACS6和SlACS7的表达则相对稳定,SlACS8至PK期表达量有所上升。SlACO基因家族各成员表达结果表明,SlACO1、SlACO2和SlACO3表达随果实成熟趋于上升,SlACO5则仅在红熟果实中略有增强表达,SlACO6的表达呈BR期上升至RR下降的趋势,而SlACO4则为组成型表达。4个SlEIL基因表达相对较稳定,其中SlEIL1在BR期表达略有上升,SlEIL4伴随着果实成熟略微上升。3、研究了转反义SlEIL1基因番茄材料(1AS-2)乙烯释放量。利用外源乙烯(100μl/L,18h)处理播种后3周转基因实生苗显示,转基因1AS-2实生苗的乙烯释放量明显低于野生型的。进而分析比较了转基因和野生型番茄果实乙烯释放速率,发现BR和BR+7的转基因和野生型番茄果实的乙烯释放速率均无显著差异。上述结果表明抑制SlEIL可导致转基因1AS-2实生苗乙烯释放受抑制,而在BR和BR+7果实中未发现此现象,需进一步探明其原因。利用转基因和野生型实生苗,发现转基因实生苗中4个SlEIL的表达都受到不同程度的抑制,同时SlACS1、SlACS3、SlACO3、SlACO4和SlACO6的表达在1AS-2转基因番茄的实生苗中受到抑制,这与乙烯释放速率一致。SlACS7和SlACS8在转基因实生苗中表达量甚至高于野生型,其余家族成员则无显著差异。推测SlEIL受抑制的转基因实生苗中乙烯释放速率的下降可能与SlACS1、SlACS3、SlACO3、SlACO4和SlACO6相关。4、研究了SlEIL对SlACS和SlACO基因启动子的调控效应。利用分离得到的SlACS1、SlACS6、SlACO2、SlACO3和SlACO4启动子构建表达载体。采用双荧光素酶体系,研究发现SlEIL转录因子可诱导SlACS1、SlACO3和SlACO4启动子的活性,而对SlACS6和SlACO2的启动子无显著影响。该结果与实生苗的基因表达结果一致,进一步表明SlEIL可转录调控SlACS1、SlACO3和SlACO4,进而反馈调控实生苗乙烯合成。
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