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本研究以6个不同杂交组合加工番茄为材料,采用醋酸洋红染液和苯酚品红染液筛选合适的核染色剂,通过观察花粉小孢子发育时期确定适合的花药接种时期;研究低温预处理、高温预处理、离心预处理和甘露醇预处理对加工番茄花药愈伤组织诱导率的影响;筛选出不同添加物和植物生长调节剂配比的最优花药培养基。并通过对加工番茄花药离体培养中细胞学和组织学的观察,对花药小孢子发育途径和愈伤组织形态与细胞学进行研究,以期建立加工番茄花药离体培养技术体系,优化花药单倍体育种技术。研究结果如下:1、加工番茄小孢子发育时期与花蕾和花药相关性研究:本试验以6个杂交组合为试验材料,研究发现不同组合的加工番茄小孢子各个发育时期所对应的花蕾、花药大小也有所不同,当花药为2-3mm时花粉处在四分孢子时期;花药长度在4-5mm时花粉处在单核中期,花药长度在6-7mm时花粉处在单核靠边期,因不同组合花蕾的萼片长度具有差异性,花药作为小孢子发育时期的检测标准更准确。2、预处理对加工番茄花药愈伤组织诱导率的影响:通过对6个杂交组合的加工番茄花药预处理的研究表明:低温处理2d的效果较好;因基因型不同高温预处理2d或6d的效果较好;离心预处理因组合不同差异性较大。甘露醇预处理的整体效果要好于低温、高温和离心预处理。不同的预处理方式对不同基因型的预处理效果不一致,因此不同品种可以选择不同的预处理方式。3、不同添加物对加工番茄花药愈伤组织诱导率的影响:利用不同添加物对加工番茄花药愈伤组织诱导率进行研究,筛选合适的诱导培养基配比。花药离体培养条件为处理29(MS+0.1g/L活性炭+1.0mg/L NAA+2.0mg/L ZT+1.0mg/L 6-BA+0.25mg/L Ag NO3+30g/L蔗糖+10g/L葡萄糖+80ml/L椰汁)时,6个杂交组合的花药愈伤组织诱导率都比较好,是最优培养基配比。当为处理8(MS+0.1mg/L NAA+1.5mg/L KT+3.0mg/L ZT+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L Ag NO3+10g/L蔗糖+10g/L葡萄糖)和处理32(MS+0.1g/L活性炭+1.0mg/L NAA+1.5mg/L KT+1.0mg/L ZT+0.5mg/L Ag NO3+20g/L葡萄糖+30g/L麦芽糖+40ml/L椰汁)时,可使5个杂交组合达到较高的花药愈伤组织诱导率,也是很好的培养基配比。本试验通过对加工番茄花药不同外源物质和生长调节剂混合配比的研究,发现不仅同一组合在不同处理下花药组织诱导率不同,即使在同一处理下不同组合的花药组织诱导率也不同。4、加工番茄花药离体培养中花药发育的细胞学和组织学观察:通过对加工番茄花药小孢子发育全过程的研究,发现加工番茄花药离体培养过程中小孢子的分裂途径有三种:多核花粉途径、均等分裂途径、非均等分裂途径。通过形态学和细胞学观察发现形成的花药愈伤组织有4种类型:一是生长速度缓慢,颜色呈绿色,圆形块状或粒状;二是生长旺盛,颜色呈白色,质地松软;三是生长速度较缓慢,颜色深绿色,形状呈扁平状,质地较坚硬;四是胚性愈伤组织生长较旺盛,颜色呈鲜黄色,质地松脆。将四种类型的愈伤组织进行镜检发现形成4种愈伤组织细胞:A:细胞染色深,细胞紧密排列在一起;B:细胞染色深,细胞排列较松散;C:细胞染色很浅,细胞排列的更加紧密;D:细胞染色较浅,细胞排列的相对疏松。