论文部分内容阅读
HIV-1整合酶(HIV-1 integrase, HTV-1 IN)是HIV-1慢病毒载体中的关键因子,在HIV-1基因整合入宿主细胞基因组过程中起重要作用。除整合病毒基因组功能外,HIV-1 IN还参与病毒生命周期的很多重要过程,如影响病毒粒子形态、病毒DNA合成和核内运输等。本研究中,我们用酵母双杂交系统发现HIV-1 IN中的四肽156KELK159在HIV-1 IN与Daxx结合中发挥重要作用,缺失该四肽的HIV-1 IN无法与Daxx结合。为进一步探索156KELK159在HIV-1慢病毒载体基因整合及表达中的作用,我们利用三质粒包装系统分别包装出含野生型HIV-1 IN及含缺失156KELK159的HIV-1 IN两种均以EGFP为报告基因的慢病毒载体。使用p24病毒滴度检测试剂盒检测病毒滴度,同时抽取病毒RNA,利用实时定量PCR检测病毒液中的RNA拷贝数,结果发现相同p24含量的两种病毒中的RNA拷贝数也相同,故156KELK159对病毒载体的包装没有影响。进一步研究发现156KELK159在HIV-1慢病毒载体基因的整合过程中发挥重要作用。两种病毒分别感染293T细胞后,156KELK159的缺失使被感染细胞中表达报告基因的细胞比例明显降低,但进入细胞内及进入细胞核内的DNA水平未发生变化。逆转录实时定量PCR及FACS被用于检测感染维胞中报告基因EGFP的表达水平,结果发现156KELK159并不影响HIV-1慢病毒载体的报告基因表达。本研究结果为进一步揭示HIV-1慢病毒载体基因整合的调控机制提供了一定理论依据。