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研究背景：垂体腺瘤是颅内常见的良性肿瘤,发病率约占颅内肿瘤的10%,且近年呈增多趋势。目前外科手术治疗是垂体腺瘤最常见的治疗方式,但仍有部分肿瘤类型如巨大腺瘤及侵袭性垂体腺瘤在临床上无法全切。当前治疗垂体腺瘤的药物品种少且不良反应较多,垂体腺瘤术后复发率较高,因此寻找高效、安全且毒副反应小的垂体腺瘤治疗药物当前是研究热点。氯化两面针碱是从中药植物两面针根中提纯的一种生物碱,前期研究表明,氯化两面针碱对多种肿瘤如肝癌、乳腺癌、肾癌等在体内、外均能够发挥抑制增殖和诱导凋亡的作用。目前氯化两面针碱在垂体腺瘤中的作用及机制的研究较少。研究目的：探讨氯化两面针碱对垂体腺瘤GH3细胞生长、细胞周期及凋亡的影响并分析其具体机制,研究氯化两面针碱对垂体腺瘤GH3细胞通路的影响,进而探讨氯化两面针碱作为垂体腺瘤治疗药物的可能性。研究方法：1.细胞分组：依照氯化两面针碱不同的给药浓度将GH3细胞分为0μmol/l组、1μmol/l组、2μmol/l组、4μmol/l组和8μmol/l组,其中0μmol/l组为空白对照组。2.细胞存活实验：氯化两面针碱处理后CCK-8法检测各组GH3细胞不同时间的存活率。3.流式细胞术检测细胞凋亡率：氯化两面针碱处理细胞24h后, Annexin V/PI凋亡试剂盒染色后流式细胞术检测各组GH3细胞凋亡率。4.流式细胞术进行细胞周期分析：氯化两面针碱处理细胞12 h后,采用PI染色法用流式细胞术进行细胞周期分析。5.RT-PCR法检测目的基因mRNA表达：不同浓度氯化两面针碱处理的细胞使用TRIzol法提取总RNA, Real-time RT-PCR法检测不同处理后凋亡相关基因Bax、Bcl-2和细胞周期相关基因Cyclin B1、CDK1、p21和p27的mRNA表达水平的改变。6.Western bloting法检测目的蛋白表达：不同浓度氯化两面针碱处理的细胞使用Western及IP细胞裂解液裂解,用BCA试剂盒测蛋白浓度。全细胞裂解液使用SDS-PAGE或Tricine-SDS-PAGE胶进行凝胶电泳,免疫印迹检测Bax、Bcl-2、 Cyclin B1、CDK1蛋白以及AKT和ERK信号通路蛋白的表达水平。7.统计学处理采用SPSS17.0软件,所得数据用x±s来表示,组间差异采用t检验。p<0.05为差异有统计学意义。研究结果：1.氯化两面针碱对GH3细胞增殖的影响氯化两面针碱对GH3细胞的增殖有明显的抑制作用,且与剂量、时间呈正相关。2.氯化两面针碱对GH3细胞凋亡的影响 氯化两面针碱明显增加了GH3细胞的凋亡率,且与剂量正相关；氯化两面针碱处理后GH3细胞促凋亡分子Bax的mRNA表达水平明显增加,而抗凋亡分子Bcl-2的mRNA表达水平明显降低,Bax/Bcl-2的比值明显增加。3.氯化两面针碱对GH3细胞周期的影响 氯化两面针碱使GH3细胞G2/M期比例增加；氯化两面针碱处理后,GH3细胞Cyclin B1和CDK1的表达明显降低,p21和p27表达明显增加。4.氯化两面针碱对GH3细胞通路激活的影响氯化两面针碱可降低GH3细胞AKT和ERK的磷酸化水平,抑制AKT和ERK信号通路的激活。结论：1.氯化两面针碱可抑制垂体腺瘤GH3细胞的增殖及促进GH3细胞的凋亡。2.氯化两面针碱对GH3细胞增殖及凋亡的作用是通过影响细胞周期和抑制AKT和ERK信号通路的激活导致的。3.氯化两面针碱可作为治疗垂体腺瘤的潜在药物,进一步研究可成为治疗垂体腺瘤的有效治疗方案。