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为探讨香茶菜属两种溪黄草类植物溪黄草(Robdosia serra(Maxim.)Hara)和线纹香茶菜(Robdosia lophanthoides(Buch.-Ham.ex.Don.)Hara)对动物常见致病菌抑菌效果的差异性及其抑菌活性成分,研究溪黄草对三黄肉仔鸡的抗感染疗效和对其生长发育的影响而开展了本试验。试验采用平皿打洞法和试管两倍稀释法比较了不同产地、不同干燥方法、不同提取工艺处理后溪黄草和线纹香茶菜对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等8种致病菌的体外抑制效果;采用两相溶剂萃取法分离出不同溪黄草组分后,测定了各组分药液对大肠杆菌、蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌的抑制效果,以确定溪黄草抗菌有效部位;并用圆形滤纸径向层析法检测了各组分成分,以确定溪黄草抗菌活性成分。选用90只健康三黄肉仔鸡随机分为9组,每组10只。I组为健康对照组,不感染不给药;II组为感染对照组,感染不给药;III组为抗生素对照组,灌服0.25mL/只恩诺沙星溶液;IV组为中药对照组,灌服0.25mL/只双黄连水煎液;V~IX为试验治疗组,分别灌服0.05、0.1、0.2、0.4、0.8mL/只溪黄草水煎液。于鸡5日龄时每隔6h灌药一次,I、II组灌服生理盐水;并于第三次灌服结束后1h给II~IX组每只鸡腹腔注射致病性大肠杆菌,I组注射同等体积生理盐水。观察各组鸡行为表现和临床症状,记录发病和死亡情况,计算各组发病率、死亡率、保护率,以证明其体内抗感染疗效。选用210只1日龄三黄肉仔鸡随机分为7组,每组3个重复,每个重复10只。I组为空白对照组,饲喂基础日粮;II组在日粮中添加0.2%恩诺沙星可溶性粉;III组添加1%双黄连粉末;IV~VII组分别在日粮上添加0.5%、1%、2%、4%的溪黄草粉。测定每周体重、采食量,计算平均日增重、日采食量、料肉比等生长性能指标,并测定血清总蛋白、白蛋白、葡萄糖、总胆固醇等血清生化指标和新城疫HI抗体效价、T淋巴细胞转化率和免疫器官指数等免疫学指标。结果显示:
1.不同产地溪黄草类植物对8种供试菌的体外抑菌效果各不相同,清远产溪黄草对8种供试菌均表现出明显的抑制效果,大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌对溪黄草醇提液均高度敏感。而线纹香茶菜,不论产自潮州、肇庆或清远,其抑菌效果远远比不上溪黄草,只有潮州产线纹香茶菜对某些细菌表现抑制作用,其余均未见抑菌作用。
2.干燥方法对溪黄草抑菌效果影响不大,晒干和阴干溪黄草呈现一致的抑菌趋势,且效果相当。
3.提取工艺对溪黄草抑菌效果有较大影响。溪黄草醇提液对供试菌的抑制效果明显比其水煎液强,最小抑菌浓度(MIC)也比其水煎液低其中对蜡状芽孢杆菌的MIC分别为3.91和7.81mg/mL,对金黄色葡萄球菌的MIC分别为7.81和15.63mg/mL。
4.溪黄草醇提液及其醇提氯仿组分对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌和肠炎沙门氏菌均表现出很强的抑菌效果,乙酸乙酯组分抗菌效果较弱。溪黄草水煎液及其水煎氯仿组分对这4种菌有一定的抑制活性,但其它各组分均不表现抑制效果。可见溪黄草抗菌有效部位主要存在于氯仿组分部分。
5.经成分检测发现,溪黄草醇提液含多种有效成分,分别为酚类、甾体、黄酮类、蒽醌类、强心苷、氨基酸和萜类化合物,醇提氯仿组分与之相比,所含有效成分较少,只有酚类、蒽醌类和萜类化合物。溪黄草水煎液只含酚类、甾体、皂苷、黄酮类、强心苷和氨基酸,不含萜类化合物。溪黄草水煎液乙酸乙酯组分含有机酸、甾体、皂苷和氨基酸,但此组分并无抗菌效果。可见溪黄草抗菌活性物质主要是黄酮类、蒽醌类和萜类化合物。
6.灌服0.2mL/只溪黄草水煎剂可降低大肠杆菌人工感染鸡的死亡率,对鸡群的保护率达62.5%,与双黄连疗效相当。
7.饲粮中添加2%溪黄草粉可使4周龄以上三黄肉仔鸡平均日增重比空白组显著提高了13.1%~22.7%,料肉比明显降低了8.1%~14.2%,其效果优于双黄连和恩诺沙星;同时可提高血清总蛋白、球蛋白和血糖含量,维持血清白蛋白含量基本稳定,降低35日龄后鸡血清总胆固醇;还可以不同程度地刺激28日龄前三黄肉仔鸡的免疫器官发育,延长ND-HI抗体存留时间和抑制T淋巴细胞增殖。
结论:
1.溪黄草对多种动物常见致病菌有体外抑菌作用,干燥方法对其抑菌活性影响不大,醇提液抑菌效果优于水煎液;线纹香茶菜基本无抑菌作用或作用很弱。
2.溪黄草抗菌有效部位主要是溶解在氯仿中的药液组分,抗菌活性物质主要是黄酮类、葸醌类和萜类化合物。
3.溪黄草水煎液可降低大肠杆菌人工感染三黄肉仔鸡的死亡率,灌服给药剂量以0.2mL/只为宜。
4.溪黄草粉可促进4周龄以上三黄肉仔鸡生长发育,添加剂量以2%为宜。