肝癌是威胁人类特别是我国人民生命健康的重大癌症之一,肝癌高死亡率的主要原因是复发和转移。为考察人肝癌细胞转移相关的分子机理以及探索相关的具重要临床医学价值的蛋白质标记分子,我们应用蛋白质组分离和分析技术研究了人肝细胞癌的高转移细胞株 MHCC97-H 和低转移细胞株MHCC97-L 之间的蛋白质组差异表达。通过双向凝胶电泳和数字化图谱的软件分析,发现 56 个蛋白质斑点在 MHCC97-H 和 MHCC97-L 中有显著差异表达(Student t-test, P<0.05), 4 个斑点只在 MHCC97-H 细胞中检测到表达,并由此建立了蛋白质组的差异表达谱。应用胶内酶解和质谱分析技术测定蛋白质斑点的多肽指纹图谱和串联质谱数据,结合数据库搜索,14 个蛋白质斑点从中得到鉴定。运用免疫印记技术不仅验证了质谱鉴定蛋白质的可靠性,而且观察到了差异表达蛋白质的翻译后修饰形式的存在。在这项研究过程中,我们同时鉴定了双向电泳凝胶上其他一些蛋白质斑点,建立了一个初步的双向凝胶电泳数据库(http://www.proteomics.ac.cn/2D/),其中包括差异和未差异表达的蛋白质。为探索不同的蛋白质组覆盖率,我们又运用“鸟枪法”结合稳定同位素标记技术,进一步做了 MHCC97-H 和 MHCC97-L 细胞差异表达蛋白质的分析。用两种版本的稳定同位素编码的亲和标签定性和定量了分析了123种蛋白质,揭示一些在双向凝胶电泳上难以观察到的低丰度和高分子量蛋白质。不同转移潜能的肝癌细胞株的蛋白质组差异表达谱分析为寻找肝癌预后的标记分子和阐释肝癌细胞转移机理奠定了一定的基础。为进一步探索蛋白质组发现的临床意义,我们从差异表达谱中筛选出细胞角蛋白 19 来做进一步的研究。用免疫印记、免疫荧光、免疫组化和发射免疫酶联标记方法在逐级转移的肝癌细胞株、临床肝癌组织切片和裸鼠模型中均发现该蛋白质高表达和肝癌细胞的转移相关。以上研究结果显示,细胞角蛋白 19 可以作为一个预测肝癌转移的标记分子和治疗肝癌转移的药物靶分子。