在各个器官中，细胞周围都是柔软的组织，而不是玻璃，塑料那样硬的表面，但是几乎所有的关于细胞的实验都是在玻璃，塑料表面进行的，然而细胞外基质硬度会对细胞产生很大的影响。它能刺激肿瘤的形成，肝癌的形成就是一个很好地例子，由于肝纤维化和肝硬化使得正常肝组织慢慢变硬从而促进了肝癌的发展。此外，自噬在肝脏疾病中也扮演着重要的角色，研究发现肝癌细胞系与正常细胞系相比较而言自噬水平降低了，暗示自噬在肿瘤的中起到抑制的作用，然而在肿瘤的发展过程中细胞外基质硬度是否会影响自噬还不清楚。　　因为LC3-II的含量与自噬体相关，而且LC3-II出现在自噬过程的各个阶段，所以选取LC3作为自噬的标记蛋白，但是有研究表明LC3是一种很容易聚集的蛋白，瞬时转染的暂时性过表达容易引起LC3的聚集，所以构建了能稳定表达自噬标记蛋白LC3的LO2稳定细胞系是必要的。为了研究基底硬度与自噬的关系，我们构建了能稳定表达自噬标记蛋白LC3的LO2稳定细胞系。我们采用一种相比于传统方法更方便，高效的方法，将瞬时转染后的细胞按照2000/孔，1000/孔，500/孔的比例种到96孔板中筛选15天，成功构建了4株稳定表达自噬标记蛋白GFP-LC3 LO2单克隆稳定细胞系，选择其中GFP-LC3表达量最高的一株进行后期的实验。　　通过改变固化剂和聚二甲硅氧烷（PDMS）的比例，我们制备出了11 kPa，124 kPa，1220 kPa三种硬度的PDMS基底，将LO2细胞培养在这三种硬度的基底和塑料表面（作为对照）48小时，接下来用荧光显微镜观察细胞中自噬体的位置，用免疫印迹法分析LC3-II的表达量，结果显示不管是24小时还是48小时，LC3-II的表达量并没有显著地差异，所以我们推断基质硬度对自噬水平的影响并不大，然而不同硬度的基底却对LO2细胞中自噬体的分布影响很大，更具体些，在软的基底上（11 kPa PDMS基底）培养48小时的LO2细胞中的自噬体在细胞核周围聚集成一个球状，而硬的基底（1220 kPa PDMS基底）或是塑料基底上的细胞中的自噬体仍然是分散在细胞质中，我们的结果显示基底硬度影响自噬不是通过直接增加自噬水平，而是通过影响细胞中自噬体的分布，这些发现将为以自噬为目标的癌症治疗提供一些新的思路。