论文部分内容阅读
本文针对上海转基因研究中心现存的Neor转基因小鼠与人源化IgM抗体五特征小鼠各自的特点分别进行了相应的检测、鉴定保种研究；并进行了普通小鼠不同阶段胚胎玻璃化冷冻保存的比较研究。 一、纯合子Neor转基因小鼠的品系建立及鉴定 通过胚胎移植的生物净化方法获得10只清洁级F1小鼠，经检测其中5只为整合阳性。采用全同胞交配方式对转基因小鼠进行繁育，经PCR、Southern blot杂交和交配实验检测相结合的方法，选育出4只纯合子，并建系。验证了由该杂合转基因小鼠胎儿制备的成纤维细胞具有G418抗性，可作为ES细胞培养中的饲养层细胞。由上述研究说明，通过遗传学和微生物学上对Neor转基因小鼠的质量控制，使Neor转基因小鼠达到了清洁级，并以纯合子状态保存。 二、人源化IgM抗体五特征小鼠的生物学特征研究 对由英国Babraham实验室引进的人源化IgM五特征小鼠分别从繁育学和免疫学方面进行了生物学特性的研究。结果表明，繁殖性能：五特征小鼠的初怀周龄为6-8周；窝产仔数、离乳数，雄性比例在不同窝间的差异显著，平均分别为5.6只、5.0只、56.0％；繁育母鼠的产仔数、离乳数在头4胎均随胎次增加而提高，4胎以后繁育能力下降；平均胎间距在不同胎次间的差异并不显著，平均为29.1天。生长发育状况：通过对29只雌鼠，34只雄鼠自出生起至9周龄，每周在同一时间进行体重称量，得出同一周龄的五特征小鼠在3周龄断奶后雄鼠生长的比雌鼠快，且差异极显著。免疫学方面的研究：对五特征小鼠血清中的IgM进行了定性和定量检测，结果表明，血清中含有人源IgM且人源IgM含量高于鼠源IgM；通过对同窝的4只雄鼠的6-11周龄血清中人源IgM含量进行测定，得出同一周龄的不同个体间的血清中人源IgM含量存在显著差异，并随鼠龄的增加而提高；经血管内皮生长因子（VEGF）抗原免疫后，五特征小鼠血清中的人源IgM含量增加，且随免疫次数增加，含量提高。 三、小鼠不同阶段胚胎玻璃化冷冻保存的比较研究 采用玻璃化冷冻法对ICR、C57BL／6、DBA*C57BL／6杂交F1代三种品系小鼠的不同阶段胚胎进行冷冻保存，比较胚胎解冻后形态良好率、体外发育率和移植后的出生率，结果表明解冻后各品系小鼠胚胎从2细胞到桑椹胚形态良好率在75％以上，其中8细胞胚胎形态良好率在83％以上，而囊胚的形态良好率仅在40％左右。解冻后胚胎体外培养的发育率随胚胎发育阶段的提高而提高，桑椹胚的发育达93％以上。体外受精2细胞冷冻胚与体内受精2细胞冷冻胚比较，二者形态良好率差异无显著意义（74％： 两种遗传工程小鼠的检测、鉴定与种质保存方法的研究75％），但体内受精冷冻胚的发育率显著高子体外受精冷冻胚门纷：40儿 p功．01)；胚胎经过三次反复冻融后形态良好率无显著差异；冷冻2细胞胚移植后的受孕率与仔鼠出生率分别达64％和40％，但均低于新鲜2细胞胚胎。