【摘 要】
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从人肺癌细胞株A549中提取了细胞mRNA,反转录合成cDNA第一链,再以此cDNA为模板进行PCR,得到了长约840pb的CPP32蛋白酶基因.该DNA用EcoRI、BamHI双酶切后,插入经EcoRI、BamHI
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从人肺癌细胞株A549中提取了细胞mRNA,反转录合成cDNA第一链,再以此cDNA为模板进行PCR,得到了长约840pb的CPP32蛋白酶基因.该DNA用EcoRI、BamHI双酶切后,插入经EcoRI、BamHI双酶切的pBV220载体码CPP32βp10亚单位的核苷酸组成.将获得的CPP32基因分别克隆到经XbaI酶切、绿豆芽核酸酶消平、BamHI酶切的pBV321载体和经EcoRI、BamHI双酶切的pEX31B载体中,得到重组质粒pBV321/CPP和pEX31B/CPP.pBV321/CPP和pEX31B/CPP分别转化到E.coli HD5α和E.coli 537中.Northern Blot表明CPP21基因在转录水平得到了表达.进行SDS-PAGE也证实,均获得了该基因在翻译水平的较高表达,表达产物主要以包涵体形式存在.CPP21基因导入大肠杆菌后明显抑制了大肠杆菌的生长,提示人源CPP32功能上的保守性.CPP32基因的克隆及表达,为进一步纯化、制备抗体、研究蛋白酶与蛋白之间相互作用等功能打下了基础.
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