中东呼吸综合征是(Middle East respiratory syndrome,MERS)是一种由单链RNA冠状病毒引起的使人畜发生急性致死性呼吸道传染病疾病。2013年,世界卫生组织(WHO)正式命名该病毒为“中东呼吸综合征病毒(MERS-Co V)”,并宣布该冠状病毒具有能在动物与动物,动物与人,人与人之间传播的高度危险性,因此引起全球各界的关注。本研究根据MERS-Co V刺突蛋白S1亚基的基因序列设计一对引物,通过PCR扩增技术,以合成序列为模板,进行PCR扩增,获得刺突蛋白的S1亚基基因片段,其大小为2253 bp,将MERS-Co V刺突蛋白S1亚基基因片段克隆到真核表达载体pEAK13CD5LTEVhIgGFc构建重组pEAK13CD5LS1TEVhIgGFc。重组质粒pEAK13CD5LS1TEVhIgGFc经限制性酶切消化后转染至HEK293E细胞,利用嘌呤霉素筛选出稳定表达重组蛋白S1-Fc的阳性克隆细胞株。培养阳性克隆细胞株,进行融合蛋白(S1-Fc)的重组表达,收集培养细胞的上清培养基,过蛋白A亲和柱进行纯化,获得了大小约为122 kD的重组蛋白,Western blotting分析表明,该蛋白即为目的蛋白。将重组质粒pEAK13CD5LS1TEVhIgGFc、重组S1-Fc蛋白以及重组质粒pEAK13CD5L S1TEVhIgGFc与S1-Fc蛋白混合物分别接种小鼠,以提纯的MERS-Co V刺突蛋白亚S1亚基-Fc融合蛋白(S1-Fc)作为抗原,利用ELISA及Western blotting实验检测了小鼠血清中的抗体滴度及特异性。研究结果表明,三种接种方法均能诱导小鼠产生特异性抗S1血清。其中,接种重组S1-Fc蛋白与同时接种重组质粒pEAK13CD5LS1TEVhIgGFc和S1-Fc蛋白的小鼠,在首次接种就产生高滴度抗S1血清,但仅接种质粒的小鼠,在第3次接种后才产生了特异性抗S1血清,并且其抗S1血清滴度明显低于前两者。两种含重组S1-Fc蛋白的接种方法诱导产生的抗S1血清滴度基本一致,并且均显著高于仅接种质粒的小鼠的抗S1血清。本研究证明了MERS-Co V刺突亚蛋白S1的蛋白质疫苗和重组质粒pEAK13CD5LS1TEVhIgGFc疫苗均能使小鼠产生抗S1血清,在短期内重组蛋白疫苗更快速有效,产生的抗S1血清的浓度更高,这为MERS-Co V疫苗的研发提供了理论和技术支持。