Ca<'2+>激活Cl<'->通道在高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞增殖过程中的作用

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本研究在双肾双夹大鼠高血压模型上探讨Ca2+激活C1电流的改变,以及与血管重构的关系。在大鼠手术后1周,4周,8周,12周分别检测细胞膜电容,Ca2+激活C1电流(电流幅度以及电流密度)。论文第一部分探讨大鼠脑基底动脉平滑肌细胞上Ca2+激活C1电流(ICI.ca)在高血压发展过程中的变化;第二部分使用不同Ca2+激动剂激活电流并探讨在高血压过程中的变化;第三部分讨论CaMKⅡ对ICI.Ca的调节以及在高血压过程中的调节变化;第四部分研究了ICI.Ca在细胞表型转变过程以及细胞周期转化过程中的作用。 本研究采用全细胞膜片钳记录方法,记录高血压过程中大鼠脑基底动脉平滑肌细胞Ca2+激活C1电流(ICI.Ca)。结果表明: 1.血压测定 2.Ca2+-激活C1通道的ca2+依赖性新鲜分离大鼠脑基底动脉平滑肌(BASM)细胞上,当电极内液Ca2+浓度([ca2+]i)为50hM以及100nM时,未能激活ICI.Ca,大于250nM时即可激活ICI.Ca,到500nM时基本能激活ICI.Ca大于500nM时激活稍有增加。 3.细胞膜电容测定2k2c手术后1w,4w,8w,12w,在新鲜分离大鼠BASM细胞上,使用全细胞记录方法记录细胞膜电容(Cm)。 4.高血压过程中测定Icl.Ca2k2c手术后1w,4w,8w,12w,在新鲜分离大鼠BASM细胞上,1μM[Ca2+]i激活Ic1.Ca。分析Cm不变化细胞的电流幅度(pA),而分析Cm增加细胞的电流密度(pA/pF)。 (1).Cm未增加细胞。 (2).Cm增加细胞。 小结: 1.高血压过程中脑基底动脉平滑肌细胞中一部分细胞细胞电容增加,出现肥大,且肥大程度与血压相关。但同时也发现部分细胞细胞电容未变化,不出现肥大,处于增殖状态。 2.1μM Ca2+激活ICI.Ca;电容增大之细胞在高血压过程中ICI.Ca电流密度(pA/pF)不断下降,电流密度下降与血压进展问呈现良好负相关。电容未增大细胞在高血压过程中ICI.Ca电流幅度(pA)不断下降,且电流幅度下降与血压间呈现良好负性相关。   第二章 高血压发展过程中大鼠脑基底动脉平滑细胞上不同钙激动剂激活Ca2+激活CT电流(Ic10AG,ICI,TG,ICI,ATP&ICI,BayK-8644)的变化   本研究采用全细胞膜片钳记录方法,记录高血压过程中大鼠脑基底动脉平滑肌细胞上不同钙激动剂激活的Ca2+激活Cl-电流(ICI.Ca)。 小结1.高血压过程中部分脑基底动脉平滑肌细胞出现肥大,但亦有部分细胞不出现肥大而处于增殖状态。 2.肥大细胞之ICl,OAG,Ict,TG,IC1,ATP&IC1,BayK-8644电流密度不断下降,且与血压进展间呈现负性相关。增殖细胞之Ic1,OAG,ICI.TG,ICI.ATP &ICI.BayK-8644电流幅度下降,与血压进展间呈现负性相关。 第三章 高血压发展过程中大鼠脑基底动脉平滑肌上CaMKII对Ca2+激活CT电流的调节变化   本研究采用全细胞膜片钳记录方法,研究CaMKⅡ对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞上ICl.ca的调节作用;并研究高血压过程中CaMKII对ICI.Ca调节作用的变化。 小结1.CaMKII的特异性抑制剂KN.93能显著增强新鲜分离脑基底动脉平滑肌细胞上ICI.Ca,提示CaMKII对ICI.Ca具有抑制作用。 2.高血压过程中,KN-93对增殖态脑基底动脉平滑肌细胞上ICI.Ca的增强作用不断增强,提示CaMKII酶活性在高血压过程中增强,对ICI.Ca的抑制作用增强。第四章大鼠脑基底动脉平滑肌细胞表型变化过程中以及细胞周期转换过程中Ca2+激活CT电流的变化本部分研究中原代培养脑基底动脉平滑肌细胞,检测平滑肌细胞表型标志物以观察细胞表型变化,并记录此过程中ICI.Ca的变化。调控培养脑基底动脉平滑肌细胞的细胞周期,记录不同细胞周期时ICI.Ca的改变。 结论: 1.高血压过程中部分脑基底动脉平滑肌细胞出现肥大,某些细胞未见肥大而处于增殖状态。 2.在高血压过程中,肥大细胞之ICI.Ca电流密度不断下降,且与血压进展问呈现负性相关。增殖细胞之ICI.Ca电流幅度不断下降,与血压间呈良好负性相关。 3.在高血压过程中,肥大细胞之ICI.OAG,ICI.TG,ICI.ATP,ICI.BayK-8644电流密度不断下降,与血压进展问呈现负性相关。增殖细胞之ICI.OAG,ICI.TG,ICI.ATP,ICI.BayK-8644电流幅度不断下降,与血压间呈良好负性相关。 4.CaMKII对脑基动脉平滑肌细胞上的ICI.ca具有抑制作用;在高血压过程中,增殖态平滑肌细胞上CaMKII对ICI.ca的抑制作用增强。 5.原代培养脑基底动脉平滑肌细胞在培养的不同阶段出现细胞表型转化,α-actin表达下降而PNCA表达增加,提示细胞从收缩分化型向合成增殖型转化。同时记录不同阶段ICI.Ca发现电流不断下降,提示ICI.Ca下降与细胞表型转化相关。 6.原代培养脑基底动脉平滑肌细胞周期转变过程中ICI.Ca电流出现变化,G0期电流比S期电流大,提示ICI.Ca下调参与细胞周期转换,促进细胞增殖。
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