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人类主要组织相容性抗原系统(majorhistocompatibilitycomplex,MHC)即人类白细胞抗原系统(humanleucocyteantigen,HLA)位于人类第6号染色体的短臂(6p21.3),是人类基因组已知编码区中多态性最高、基因最复杂的遗传系统,其编码的细胞表面糖蛋白分子在机体的免疫识别、器官及骨髓移植、疾病相关性等医学研究方面以及在探讨人类起源、迁移和不同群体的遗传关系等人类学研究方面都有着重要的意义。
本文首先对HLA-DRB1、DPB1基因的PCR-SBT分型方法进行了改进研究,然后应用该方法对云南哈尼族进行了HLA-DRB1、DPB1基因多态性研究。同时,对哈尼族和世界各地其他人群进行了HLA-DPB1基因频率的比较和聚类分析。在国际组织相容性工作组(InternationalHistocompatibilityWorkingGroup,IHWG)推荐的HLA-DRB1、DPB1基因PCR-SBT方法的基础上,我们在HLA-DPB1基因的第二外显子两侧的内含子内设计了一对外引物,将原方法改进为巢式PCR-SBT方法,并将测序引物选取在远离第二外显子5端上游约190bp处。这样既提高了分型的灵敏性,节约了样品DNA的用量,也大大地增加了所测序列5端的可读性。
我们应用该方法对云南47例哈尼族样品进行了HLA-DRB1、DPB1基因分型研究,共准确地检测到18种DRB1等位基因,最常见的是DRB1*12021(20.21%),其次是DRB1*14011(13.83%)、DRB1*09012(12.77%)和DRB1*15011(11.7%);12种DPB1等位基因,最常见的是DPB1*0501(42.55%)、DPB1*1301(21.28%)和DPB1*0402(10.64%)。
Hardy-Weinberg平衡检测表明,在哈尼族DRB1与DPB1杂合子频率的观察值与期望值较好地吻合。哈尼族HLA-DPB1基因的Evens-Watterson中性选择检测结果显示HLA-DPB1基因是遵循中性选择模式进化的。
通过对哈尼族DRB1、DPB1主要等位基因频率的比较分析,民族学所认为是古羌族系的哈尼族在HLA-DRB1、DPB1基因频率的遗传结构上更接近于中国南方人群。中华民族7个人群的HLA-DRB1、DPB1等位基因频率的比较分析表明,在南北人群中这两个等位基因的频率具有一定的规律性,这提示我国人群可以划分为南北两大类群,而且似乎更倾向南方起源说。同时,以世界13个人群的HLA-DRB1、DPB1等位基因频率为基础构建的系统树支持了我国人群可分为南方和北方两大类群的观点。