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近年来,各类抗生素在畜禽养殖业中的大量乃至过量使用,致使环境中抗生素抗性细菌(Antibiotic resistance bacteria，ARB)和抗生素抗性基因(Antibiotic resistance genes ARGs)的污染正在加剧。作为环境中抗生素耐药菌和抗性基因的重要源头,畜禽环境中ARB和ARGs的相关研究较少,特别是养殖场空气环境中ARB和ARGs污染规律未见系统研究。针对以上不足,对北京地区某典型蛋鸡养殖场粪便,舍内外空气样本进行采集,对其中ARB的浓度,耐药性以及影响因素进行分析,在此基础上,考察了 ARGs污染种类和浓度。本研究结果将为养鸡场环境中ARB和ARGs对周围环境的危害评估和制定相应的控制措施提供基础依据。首先,我们采用6级撞击式采样器采集鸡舍内外空气,同时采集蛋鸡粪便,对其中的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、金黄色葡萄球菌(S)和总细菌(LB)浓度变化趋势及其可能的影响因素进行分析。通过K-B药敏纸片法对鸡场空气和粪便中MRSA对7大类14种抗生素,青霉素(PEN)、氨苄西林(AMP)、头孢哌酮(CFP)、链霉素(STR)、庆大霉素(GEN)、阿米卡星(AMK)、红霉素(ERY)、环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LEV)、诺氟沙星(NOR)、四环素(TET)、强力霉素(DOX)、磺胺甲恶唑(SXT)、万古霉素(VAN)的耐药情况进行研究。运用微滴数字PCR(ddPCR)技术对鸡场舍内外空气和粪便样本中的6类22种抗生素抗性基因,β-内酰胺类(blaPSE,blaCTXM,blaTEM,blaOXA10,mecA),氨基糖苷类(aadAl,aadA2,strB,aac(6’)-Ⅱ,aphA3),大环内酯类(mpha,mefA,ermA,ermB),磺胺类(suI1,su12,dfrA1),四环素类(tetG,tetW,tetQ),万古霉素(VanA,VanB)和两类基因整合子(intI1,intI2)进行定量分析。研究结果表明,空气和粪便中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌浓度平均浓度为4.31±4.56×102CFU·m-3和3.37±4.83×104CFU·m-3,占金黄色葡萄球菌比例分别为41.99%±26.99%和22.11%±20.06%。鸡舍内空气和粪便中总细菌浓度随蛋鸡的日龄增加而呈现线性升高;整体上,金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌浓度随日龄增加而增加,并受舍内温度和颗粒物浓度的影响。药敏实验结果表明,本次实验所分离到的MRSA和金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、喹诺酮类、四环素类均表现出显著的耐药性,对磺胺甲恶唑和阿米卡星敏感性较高,对多肽类的万古霉素则为完全敏感。粪便中的金黄色葡萄球菌和MRSA对头孢哌酮的耐药程度,随蛋鸡日龄的增加而下降,与蛋鸡日龄呈显著负相关,对诺氟沙星的耐药程度与蛋鸡日龄呈显著正相关,在蛋鸡日龄较小时表现出轻度耐药,到成年时期则出现高度耐药乃至完全耐药情况。抗性基因究结果显示,本研究所选取的6类ARGs的目标基因及两类基因整合子在鸡舍空气和粪便中大部分都可以被检测到。其中blaTEM、aadA1、aadA2、ermB、tetW、sulI2、sulI1为空气和粪便样品中检出率及丰度较高的基因。从各类抗性基因总量角度来看,依次排序为,氨基糖苷类 ＞ 四环素类＞β-内酰胺类＞ 大环内酯类 ＞ 磺胺类 ＞ 多肽类。所选取的六类ARGs中均有与移动基因元件(intI1、intI2)呈显著正相关的目标基因,且这种正相关性在粪便样本中检出较多,舍内空气样本次之。