芋螺毒素（Conotoxin,Ctx）是由热带海洋肉食性软体动物芋螺（Conus）分泌的一类活性多肽,通常由10～40个氨基酸构成,含2～4对分子内二硫键。由于其分子量小、结构多样、针对靶点特异性强、活性显著等特点,现已成为二硫键氧化折叠、多肽-受体相互作用、以及新药开发的研究热点。本课题组前期从南海产疣缟芋螺（Conus lividus）的c DNA中克隆得到了两条新型M超家族芋螺毒素氨基酸序列,分别命名为Lv68和Lv78,它们均含有6个半胱氨酸,通过氧化折叠可形成三对分子内二硫键。本研究通过固相合成法合成芋螺毒素Lv68线性肽,研究并优化了其二硫键的一步氧化折叠条件（缓冲液、氧化剂、反应时间等）,并通过电压膜片钳技术对其主折叠产物进行了多种烟碱型乙酰胆碱受体亚型（α3β4、α6β4、α4β2、α9α10、α1β1γδ、α1β1δεn ACh Rs）的活性测试。结果表明,芋螺毒素Lv68的一步法氧化折叠最优条件为反应体系组成为0.1 mol·L-1Tris-HCl、1 mmol·L-1EDTA、GSH/GSSG 1 mmol·L-1/1mmol·L-1,线性肽浓度为50μmol·L-1,反应时间为2 h,产率高达18.14%,Lv68折叠肽在1μmol·L-1浓度下对α9α10 n ACh R具有较好的阻断作用（阻断率约80%）。本研究明确了芋螺毒素Lv68的一步氧化折叠条件,证实了Lv68对α9α10乙酰胆碱受体亚型具有阻断活性,拓宽了含半胱氨酸框架III的M超家族芋螺毒素的作用靶点范围,提示Lv68具有作为镇痛药物先导化合物研究开发的潜力和价值。本研究通过固相合成法合成线性芋螺毒素Lv78,采用一步氧化法对芋螺毒素氧化折叠常用的反应条件进行了优化（缓冲液、氧化剂、反应时间等）,通过乙酰胆碱受体（n ACh Rs）亚型（α3β4、α9α10）电生理检测、斑马鱼行为能力影响试验和小鼠热板镇痛模型试验对其折叠产物进行了初步活性探究。结果表明,芋螺毒素Lv78的一步法氧化折叠最优条件为反应体系组成为0.1 mol·L-1NH4HCO3、1 mmol·L-1EDTA、1 mmol·L-1/0.5 mmol·L-1GSH/GSSG,线性肽浓度为50μmol·L-1,反应时间缩短为1h,产率高达34.94%,使得反应效率大大提升。活性初探结果表明,芋螺毒素Lv78折叠产物对检测的乙酰胆碱受体亚型不具有阻断活性,对斑马鱼具有一定的麻痹作用,且使小鼠的痛阈明显提高,显示其具有较好的镇痛活性。本研究通过研究并优化芋螺毒素Lv68和Lv78的一步氧化合成方法,明确了它们最优的一步法氧化折叠条件,使其氧化折叠效率明显提高,并初步探究了它们与镇痛相关的作用靶点和生物活性,为后续将其开发成为新型镇痛药物先导分子的深入研究奠定了工作基础,也为其他含多对二硫键芋螺毒素的氧化折叠、生物活性研究,以及深入开发利用提供了重要的参考借鉴。